{countResult} авто по параметрам: 

Смотреть все {countResult} объявлений →

Шкода Рапид по годам

• Октавия
• СуперБ
• Кодьяк
• Смотреть все →

С Skoda Rapid также ищут

1. Купить авто
2. Марки машин
3. Купить авто бу
4. Технические характеристики авто
5. Skoda
6. Skoda Rapid
7. Фото Skoda Rapid
8. Технические характеристики Skoda Rapid

Другие сервисы

1. Проверка авто
2. Автодилеры Skoda
3. Технические характеристики Skoda Rapid
4. Автосалоны Skoda
5. Новые Skoda
6. Запчасти

ВНИМАНИЕ!
В Вашем браузере отключен JavaScript.

Функциональность страниц может быть ограничена или вовсе не возможна.

Включите JavaScript,

это займет всего пару минут.

Включить

Внимание! Вы используете режим «Частный доступ».

Отключите режим приватного доступа, чтоб воспользоваться поиском б/у авто.
Как отключить?

Снято с производства Rapid Style 1.5 TDI AT на дороге Цена

| Оценить и выиграть

• Rapid

• Изображения

• Обзор 360°

9 0019

Технические характеристики

• Цвета

• Отзывы пользователей

Посмотреть Автомобиль

снят с производства

Version

Style 1. 5 TDI AT

City

Показать цену в моем городе

рупий. 12,46 лакх

Skoda Rapid Style 1.5 TDI AT Резюме

Skoda Rapid Style 1.5 TDI AT — топ-модель в линейке Rapid, а цена топ-модели Rapid составляет рупий. 12.46 лакх. Это дает пробег 21,72 км/ч. Skoda Rapid Style 1.5 TDI AT доступен с автоматической коробкой передач и предлагается в 4 цветах: углеродистая сталь, бежевый капучино, серебристый бриллиант и белый конфеты.

Подробнее

Быстрые альтернативы

Maruti Ciaz

рупий. 9.30 Лакхонвордс

Ср. Цена экс-салона

Показать цену в моем городе

Honda City

руб. 11.60 Лакхонвордс

Ср. Цена экс-салона

Показать цену в моем городе

Hyundai Verna

руб. 10,90 Лакхонвордс

Ср. Цена экс-салона

Показать цену в моем городе

Volkswagen Virtus

руб. 11.48 Лакхонвордс

Ср. Цена экс-салона

Показать цену в моем городе

Skoda Slavia

рупий. 11.39 Лакхонвордс

Ср. Цена экс-салона

Показать цену в моем городе

Hyundai i20

руб. 7.19 Лакхонвордс

Ср. Цена экс-салона

Показать цену в моем городе

Honda Amaze

руб. 7.07 Лакхонвордс

Ср. Цена экс-салона

Показать цену в моем городе

MG Astor

руб. 10,82 Лакхонвордс

Ср. Цена экс-салона

Показать цену в моем городе

Киа Сонет

рупий. 7,79 Лакхонвордс

Ср. Цена с автосалона

Показать цену в моем городе

Rapid Style 1.5 TDI AT Брошюра

Посмотреть другие брошюры

Rapid Style 1.5 TDI AT Цвета

Следующие 4 цвета доступны для Rapid Style 1. 5 TDI AT.

Углеродистая сталь

Напишите подробный отзыв, и вы сможете выиграть ваучер Amazon на сумму рупий. 2,000

Skoda Rapid Style 1.5 TDI AT Отзывы

• (11 оценок) 10 Отзывов

• Худшее обслуживание.

  Опыт покупки и опыт вождения превосходны. Выглядит потрясающе, да и производительность тоже хорошая. Но как только вы попадаете в сервисную часть, и если вы из Кералы, никогда не ждите хорошего обслуживания от дилерского центра Skoda. Они худшие. Я купил Skoda Black edition Automatic в апреле 2015 года, и после 4 лет пробега чуть более 1 лакха км его мехатроника исчезла, и самое приятное то, что у них нет сервисного центра в Керале, чтобы его отремонтировать. Моя гарантия закончилась как раз перед тем, как машина сломалась, и последние 3 месяца моя машина находится в их мастерской, и после постоянных звонков они просят дать мне разрешение отвезти мою машину в сервисный центр в Коимбатур. Я заплатил 13,75 лакха за эту машину, включая сумму кредита в размере 8 лакхов сроком на 7 лет. Сначала они сказали, что поддержат меня в ремонте автомобиля, но позже сказали, что мне нужно заплатить всю сумму 2,7 лакха, чтобы отремонтировать его, и они не смогут меня поддерживать вообще. Поэтому мое личное мнение таково: если вы из Кералы, попросите вас не покупать автомобили Skoda, поскольку их послепродажное обслуживание жалко.

  Рейтинг параметров(из 5)

  Внешний вид

  ---

  Комфорт

  ---

  Производительность

  ---

  Экономия топлива

  ---

  Соотношение цена-качество

  9 0004 О рецензенте

  Покупка нового

  Привод для своих мой друг с возрастом

  Подробнее

  Был ли этот отзыв полезен?

  18
  1

• Шкода!!!!!!!! Просто действуй

  Нет слов, чтобы объяснить. Dsg — это лучший вариант для любых автомобилей с автоматической коробкой передач. Просто превосходно.. опыт вождения — это еще одна вещь, которая вам понравится, когда речь идет о dsg. Стоимость обслуживания меньше, так как теперь мы получаем пакет обслуживания на 6 лет.

  Рейтинг параметров(из 5)

  Внешний вид

  ---

  Комфорт

  ---

  Производительность

  ---

  Экономия топлива

  ---

  Соотношение цена-качество

  О рецензенте

  Покупка Новый

  Проехал несколько тысяч километров

  Подробнее

  Был ли этот обзор полезен?

  1
  0

• Плохой пробег

  Музыкальная система сильно зависает (иногда не работает при подключении через Bluetooth, например, песня просматривается на телефоне, но не воспроизводится в автомобильной системе) Я жалуюсь на это так много раз, но они не могут решить эту проблему, подвеска не очень хорошая, пробег очень плохой.

  Рейтинг параметров(из 5)

  Внешний вид

  ---

  Комфорт

  ---

  Производительность

  ---

  Экономия топлива

  ---

  Соотношение цена-качество

  9 0004 О рецензенте

  Купить новый

  Driven forFew тысяч километров

  Подробнее

  Был ли этот отзыв полезен?

  0
  0

Читать все отзывы пользователей

Часто задаваемые вопросы о Rapid Style 1.

В: Какова цена Rapid Style 1.5 TDI AT?

Rapid Style 1.5 TDI AT по цене ‎рупий. 12.46 лакх.

В: Как производительность Rapid Style 1.5 TDI AT?

Style 1.5 TDI AT приводится в движение дизельным двигателем объемом 1498 куб.см, работающим в паре с 7-ступенчатой ​​автоматической коробкой передач с ручным управлением и спортивным режимом, развивающей мощность 109 л.с. и крутящий момент 250 Нм.

Подробнее

В: Какой пробег у Rapid Style 1.5 TDI AT?

Пробег Rapid Style 1.5 TDI AT составляет 21,72 км/ч.

• Дом
• Автомобили Skoda
• Рапид
• org/ListItem»> Стиль 1.5 TDI AT

Платформа отображения поверхности дрожжей для быстрого обнаружения конформационно-селективных нанотел

• Технический отчет
• Опубликовано: 12 февраля 2018 г.

• Конор МакМахон ¹ ,
• Александр С. Байер ORCID: orcid.org/0000-0003-1647-9477 ¹ ,
• Роберта Пасколутти ¹ ,
• Марчин Вегрецки ORCID: orcid.org/0000-0002-3275-9850 ² ,
• Сандуо Чжэн ¹ ,
• Дженис X. Онг ¹ ,
901 48 Сара К. Эрландсон ¹ ,
• Даниэль Хилгер ³ ,
• Сорен Г. Ф. Расмуссен ² ,
• Аарон М. Ринг ⁴ ,
• Аашиш Манглик ORCID: orcid.org/0000-0002-7173-3741 ^5,6 и
• …
• Эндрю К. Круз ORCID: orcid.org/0000-0002-1467-1222 ¹  

Природа Структурная и молекулярная биология том 25 , страницы 289–296 (2018)Процитировать эту статью

• 55 тыс. обращений

• 244 Цитаты

• 200 Альтметрический

• Детали показателей

Предметы

• Мембранные белки
• Структурная биология

Abstract

Однодоменные фрагменты антител верблюдовых («нанотела») обеспечивают замечательную специфичность антител в пределах одного домена иммуноглобулина V _HH массой 15 кДа. Эта уникальная особенность позволила использовать их в самых разных областях: от использования в качестве биохимических инструментов до терапевтических средств. Нанотела стали особенно полезными инструментами в структурной биологии белков, облегчая исследования конформационно-динамических белков, таких как рецепторы, связанные с G-белком (GPCR). Почти все нанотела, доступные на сегодняшний день, были получены путем иммунизации животных, что является узким местом, ограничивающим многие применения этой технологии. Чтобы решить эту проблему, мы сообщаем о платформе полностью in vitro для обнаружения нанотел на основе отображения поверхности дрожжей. Мы предоставляем план для идентификации нанотел, демонстрируем полезность библиотеки путем кристаллизации нанотела с его антигеном, и, что наиболее важно, мы используем платформу для обнаружения конформационно-селективных нанотел по отношению к двум различным GPCR человека. Чтобы облегчить широкое развертывание этой платформы, библиотека и связанные с ней протоколы находятся в свободном доступе для некоммерческих исследований.

Это предварительный просмотр содержимого подписки, доступ через ваше учреждение

Соответствующие статьи

Статьи открытого доступа со ссылками на эту статью.

• Структурные основы активации и узнавания α1A-адренорецепторов внеклеточным нанотелом

  • Йосуке Тойода
  • , Анци Чжу
  •  … Сянюй Лю

  Связь с природой Открытый доступ 20 июня 2023 г.

• Аллостерическая активация синтеза клеточной стенки во время роста бактерий

  • Ирина Шлосман
  • , Илэйн М. Фивенсон
  •  … Джозеф Дж. Лопаро

  Связь с природой Открытый доступ 10 июня 2023 г.

• Механизм специфичности гликоформ и защита in vivo с помощью антиафукозилированного нанотела IgG

  • Аарон Гупта
  • , Кевин С. Као
  •  … Джеффри В. Раветч

  Связь с природой Открытый доступ 18 мая 2023 г.

Варианты доступа

Доступ к Nature и 54 другим журналам Nature Portfolio

Получите Nature+, нашу самую выгодную подписку на онлайн-доступ

24,99 € / 30 дней

отменить в любое время

Узнать больше

Подписаться на этот журнал

Получить 12 печатных номеров и доступ в Интернете

209,00 € в год

всего 17,42 € за выпуск

Узнать больше 900 03

Взять напрокат или купить это артикул

Цены зависят от типа изделия

от 1,95 доллара США

до 39,95 доллара США

Узнать больше

Цены могут облагаться местными налогами, которые рассчитываются при оформлении заказа

Рис. 2: Валидация платформы нанотел с использованием HSA в качестве целевого антигена.

Ссылки

1. Hamers-Casterman, C. et al. Встречающиеся в природе антитела, лишенные легких цепей. Природа 363 , 446–448 (1993).

   Артикул КАС пабмед Google Scholar

2. Muyldermans, S. Нанотела: природные однодоменные антитела. год. Преподобный Биохим. 82 , 775–797 (2013).

   Артикул КАС пабмед Google Scholar

3. Ираннежад, Р. и др. Конформационные биосенсоры выявляют передачу сигналов GPCR от эндосом. Природа 495 , 534–538 (2013).

   Артикул КАС пабмед Google Scholar

4. Rasmussen, S.G. et al. Структура стабилизированного нанотелом активного состояния β(2)-адренорецептора. Природа 469 , 175–180 (2011).

   Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

5. Staus, D. P. et al. Аллостерические нанотела раскрывают динамический диапазон и разнообразные механизмы активации рецепторов, связанных с G-белком. Природа 535 , 448–452 (2016).

   Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

6. Манглик А., Кобилка Б.К. и Стейарт Дж. Нанотела для изучения структуры и функции рецептора, связанного с G-белком. год. Преподобный Фармакол. Токсикол. 57 , 19–37 (2017).

   Артикул КАС пабмед Google Scholar

7. «>

   Мутель, С. и др. NaLi-h2: универсальная синтетическая библиотека гуманизированных нанотел, обеспечивающая высокофункциональные антитела и интратела. eLife 5 , e16228 (2016).

   Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

8. Гао, Дж., Сидху, С.С. и Уэллс, Дж.А. Отбор конформационно-специфических антител с двумя состояниями. Проц. Натл. акад. науч. США 106 , 3071–3076 (2009 г.).

   Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

9. Ризк, С. С. и др. Аллостерический контроль сродства связывания лиганда с использованием сконструированных конформационно-специфических эффекторных белков. Нац. Структура Мол. биол. 18 , 437–442 (2011).

   Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

10. «>

    Адамс, Дж. Дж. и Сидху, С. С. Технологии синтетических антител. Курс. мнение Структура биол. 24 , 1–9 (2014).

    Артикул КАС пабмед Google Scholar

11. Каюшин А., Коростелева М., Мирошников А. Крупномасштабное твердофазное получение 3′-незащищенных тринуклеотидных фосфотриэфиров – прекурсоров для синтеза тринуклеотидных фосфорамидитов. Нуклеозиды Нуклеотиды Нуклеиновые кислоты 19 , 1967–1976 (2000).

    Артикул КАС пабмед Google Scholar

12. Каюшин А.Л. и др. Удобный подход к синтезу тринуклеотидных фосфорамидитов-синтонов для создания библиотек олигонуклеотидов/пептидов. Nucleic Acids Res 24 , 3748–3755 (1996).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

13. «>

    Бодер, Э. Т. и Виттруп, К. Д. Дисплей поверхности дрожжей для скрининга комбинаторных полипептидных библиотек. Нац. Биотехнолог. 15 , 553–557 (1997).

    Артикул КАС пабмед Google Scholar

14. Kruse, A.C. et al. Активация и аллостерическая модуляция мускаринового ацетилхолинового рецептора. Природа 504 , 101–106 (2013).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

15. Ракестроу Дж. А., Сазински С. Л., Пиатеси А., Антипов Э. и Виттруп К. Д. Направленная эволюция секреторного лидера для улучшенной экспрессии гетерологичных белков и полноразмерных антител в Saccharomyces cerevisiae . Биотехнология. биоинж. 103 , 1192–1201 (2009).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

16. «>

    Орлеан П. Архитектура и биосинтез клеточной стенки Saccharomyces cerevisiae . Генетика 192 , 775–818 (2012).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

17. Makrides, S.C. et al. Увеличенный период полураспада in vivo человеческого растворимого рецептора комплемента типа 1, слитого с рецептором, связывающим сывороточный альбумин. Дж. Фармакол. Эксп. тер. 277 , 534–542 (1996).

    КАС пабмед Google Scholar

18. Ван Рой, М. и др. Доклиническая фармакология нанотела ALX-0061 с высоким сродством к IL-6R поддерживает его клиническую разработку при ревматоидном артрите. Артрит Рез. тер. 17 , 135 (2015).

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

19. «>

    Тижинк Б.М. и др. Улучшенное нацеливание на нанотела рецептора антиэпидермального фактора роста путем связывания с альбумином: использование преимуществ модульной технологии нанотел. Мол. Рак Тер. 7 , 2288–2297 (2008).

    Артикул КАС пабмед Google Scholar

20. Kim, C.C., Wilson, E.B. & DeRisi, J.L. Улучшенные методы магнитной очистки малярийных паразитов и гемозоина. Малар. J. 9 , 17 (2010).

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

21. Расмуссен С.Г. и др. Кристаллическая структура комплекса β ₂ адренергический рецептор-Gs-белок. Природа 477 , 549–555 (2011).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

22. Ринг, А. М. и др. Активированная адреналином структура β ₂ -адренорецептора, стабилизированная сконструированным нанотелом. Природа 502 , 575–579 (2013).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

23. Манглик, А. и Кобилка, Б. Роль динамики белка в функции GPCR: выводы из исследования β ₂ АР и родопсин. Курс. мнение Клеточная биол. 27 , 136–143 (2014).

    Артикул КАС пабмед Google Scholar

24. Rosenbaum, D.M. et al. Структура и функция комплекса необратимый агонист-β(2)-адренорецептор. Природа 469 , 236–240 (2011).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

25. Staus, D. P. et al. Регуляция функции β2-адренорецепторов конформационно-селективными однодоменными интрателами. Мол. Фармакол. 85 , 472–481 (2014).

    Артикул пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

26. Виджаян, Д., Янг, А., Тенг, М. В. Л. и Смит, М. Дж. Нацеливание на иммуносупрессивный аденозин при раке. Нац. Преподобный Рак 17 , 709–724 (2017).

    Артикул КАС пабмед Google Scholar

27. Хино, Т. и др. Инактивация рецептора, связанного с G-белком, аллостерическим антителом обратного агониста. Природа 482 , 237–240 (2012).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

28. Weiskopf, K. et al. Разработаны варианты SIRPα в качестве иммунотерапевтических адъювантов к противоопухолевым антителам. Наука 341 , 88–91 (2013).

    Артикул КАС пабмед Google Scholar

29. «>

    Манглик А. и др. Структурное понимание динамического процесса передачи сигналов β2-адренергических рецепторов. Cell 161 , 1101–1111 (2015).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

30. Zou, Y., Weis, W. I. & Kobilka, B. K. Слияние N-концевого лизоцима T4 облегчает кристаллизацию рецептора, связанного с G-белком. PLoS One 7 , e46039 (2012 г.).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

31. Jaakola, V. P. et al. Кристаллическая структура рецептора аденозина A2A человека, связанного с антагонистом, с размером волны 2,6 ангстрем. Наука 322 , 1211–1217 (2008).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

32. Whorton, M. R. et al. Мономерный рецептор, связанный с G-белком, изолированный в частице липопротеина высокой плотности, эффективно активирует свой G-белок. Проц. Натл. акад. науч. США 104 , 7682–7687 (2007 г.).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

33. Liberles, S.D. & Buck, L.B. Второй класс хемосенсорных рецепторов в обонятельном эпителии. Природа 442 , 645–650 (2006).

    Артикул КАС пабмед Google Scholar

34. Кэффри М. и Черезов В. Кристаллизация мембранных белков с использованием липидных мезофаз. Нац. протокол 4 , 706–731 (2009).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

35. Hein, K.L. et al. Кристаллографический анализ выявляет уникальный сайт связывания лидокаина на сывороточном альбумине человека. Дж. Структура. биол. 171 , 353–360 (2010).

    Артикул КАС пабмед Google Scholar

36. Эмсли, П. и Коутан, К. Кут: инструменты построения моделей для молекулярной графики. Acta Кристаллогр. Д биол. Кристаллогр 60 , 2126–2132 (2004).

    Артикул пабмед Google Scholar

37. Adams, P.D. et al. PHENIX: комплексная система на основе Python для решения макромолекулярной структуры. Акта Кристаллогр. Д биол. Crystallogr 66 , 213–221 (2010).

    Артикул КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

Ссылки на скачивание

Благодарности

Финансовая поддержка данной работы была предоставлена ​​Фондом Валле (ACK), Фондом семьи Смитов (ACK), грантами Национального института здравоохранения 5DP5OD021345 (ACK), 1DP5OD02304 8 (утра) и 1DP5OD023088 (AMR), Фонд Лундбек (грант № R37-A3457 для SGFR) и Датский независимый исследовательский совет (грант № 0602-02407B для SGFR).

Информация об авторе

Авторы и организации

1. Кафедра биологической химии и молекулярной фармакологии Гарвардской медицинской школы, Бостон, Массачусетс, США

   Конор МакМахон, Александр С. Байер, Роберта Пасколутти, Сандуо Чжэн, Дженис С. Онг , Sarah C. Erlandson & Andrew C. Kruse

2. Кафедра неврологии Копенгагенского университета, Копенгаген, Дания

   Marcin Wegrecki & Søren G. F. Rasmussen

3. Кафедра молекулярной и клеточной физиологии, Стэнфордский университет, Стэнфорд, Калифорния, США

   Daniel Hilger

4. Кафедра иммунобиологии, Йельская школа медицины, Нью-Хейвен, Коннектикут, США

   Аарон М. Ринг 90 003

5. Кафедра фармацевтической химии, Калифорнийский университет, Сан-Франциско, Сан-Франциско, Калифорния, США

   Аашиш Манглик

6. Кафедра анестезии и периоперационного ухода, Калифорнийский университет, Сан-Франциско, Сан-Франциско, Калифорния, США

   Аашиш Манглик

1. Conor McMahon

   Посмотреть публикации автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

2. Александр С. Байер

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

3. Roberta Pascolutti

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Академия

4. Marcin Wegrecki

   Посмотреть публикации автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

5. Sanduo Zheng

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

6. Janice X. Ong

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

7. Sarah C. Erlandson

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

8. Daniel Hilger

   Посмотреть публикации автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

9. Søren G. F. Rasmussen

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

10. Аарон М. Ринг

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

11. Aashish Manglik

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

12. Andrew C. Kruse

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

Вклады

А.К.К., А.М. и К.М. разработал и создал библиотеку нанотел. C.M., A.S.B. и A.C.K. осуществляется контроль качества библиотеки. К.М., Р.П., С.З., Дж.Х.О., Д.Х. и А.М. приготовленные антигены, проведенные отборы и изолированные связывающие нанотела. C.M., R.P. и S.C.E. охарактеризованные нанотела. А.М.Р., А.М. и А.К.К. разработали модифицированную систему дрожжевого дисплея и связанные векторы экспрессии. M.W. и S.G.F.R. очищенный рецептор аденозина A2A. C.M., A.M. и A.C.K. написал рукопись при содействии и участии всех соавторов.

Авторы переписки

Переписка с Аашиш Манглик или Эндрю К. Круз.

Декларация этики

Конкурирующие интересы

Авторы не заявляют о конкурирующих финансовых интересах.

Дополнительная информация

Примечание издателя: Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и ​​институциональной принадлежности.

Интегрированная дополнительная информация

Дополнительный рисунок 1 Биохимическая проверка клонов нанотел

(a–k ) Случайно выбранные нанотела были экспрессированы и очищены из E. coli , затем проанализированы методом эксклюзионной хроматографии для оценки монодисперсности. ( l ) SDS-PAGE анализ чистоты нанотел после одностадийной аффинной очистки никеля.

Дополнительный рисунок 2 Дизайн системы отображения

( a ) Система отображения была разработана с использованием высокоаффинного варианта SIRPα CV1 в качестве тестируемого белка и его лигандного эктодомена CD47 в качестве окрашивающего реагента. Биотиновая метка схематически представлена ​​в виде светящегося красного круга. ( b ) Длина области ножки определяет доступность отображаемого белка в зависимости от молекулярной массы. ( c ) Графики аналитической проточной цитометрии, показывающие зависимость от длины для двух окрашивающих реагентов: биотина CD47 и антитела α-HA. Длинный стебель из 649 аминокислот использовался во всех экспериментах по отображению нанотел.

Дополнительный рисунок 3 Анализ нанотел, нацеленных на HSA

( a ) Дизайн библиотеки оценивали путем мониторинга изменения частоты аминокислот в CDR3 на протяжении раундов отбора с HSA в качестве антигена. Наблюдались незначительные изменения, с единственной заметной тенденцией умеренного увеличения частоты основного остатка и снижения частоты кислотного остатка. ( b ) Оценка связывания Nb.b201 с сывороточным альбумином человека с помощью поверхностного плазмонного резонанса, сравнение с мышиным сывороточным альбумином, который не показывает обнаруживаемого связывания. ( c ) Составная карта 2Fo-Fc с пропуском контура 1,5 σ для связанного с антигеном Nb.b201. Показана структура как связанной (желтый), так и свободной (серый) форм нанотела, подчеркивая структурное расхождение. ( d ) Составная карта 2Fo-Fc с опущением, контурированная при 1,5 σ для свободного Nb.b201.

Дополнительный рисунок 4 Открытие нанотел с неочищенным антигеном

( a ) Для селекции нанотел использовали кондиционированную среду, содержащую адипонектин (левая полоса). Он показывает сложную смесь белков по оценке SDS-PAGE. Для справки: очищенный адипонектин показан на правой дорожке. Адипонектин существует в виде смеси 16-меров, гексамеров и тримеров. ( b ) Схема процесса отбора. Флуоресцентное антитело против FLAG использовали для специфической маркировки тех дрожжевых клеток, которые демонстрируют связывающие адипонектин нанотела. ( c ) Проточный цитометрический анализ конечного пула клонов, показывающий, что библиотека была сильно обогащена адипонектин-связывающими клонами. ( d ) Последовательности пяти выбранных клонов показали сильно различающиеся по составу и длине последовательности CDR3. ( e ) Связывание оценивали с использованием in vitro pull-down с очищенным глобулярным доменом адипонектина. ( f ) Связывание с адипонектином было дополнительно подтверждено in vitro с использованием поверхностного плазмонного резонанса. Кинетическая подгонка показана для клона Nb.AQ103.

Дополнительный рисунок 5. Сродство β

Титрование на дрожжах для оценки сродства β ₂ AR связывающие нанотела. Значения EC50 приведены в правом нижнем углу. Нижняя панель показывает измерение конформационной селективности для выбранных клонов, оцененное с помощью проточной цитометрии.

Дополнительная информация

Дополнительный текст и рисунки

Дополнительные рисунки 1–5, дополнительные таблицы 1 и 2 и дополнительное примечание 1 131 Права и разрешения

Перепечатка и разрешения

Об этой статье

Эту статью цитирует

• Автоматизированная оптимизация растворимости и конформационной стабильности антител и белков

  • Анджело Росаче
  • Аня Беннет
  • Пьетро Сорманни

  Nature Communications (2023)

• Структурная основа селективности лигандов, обусловленной эффективностью, в GPCR

  • Александр С. Пауэрс
  • Ви Фам
  • Рон О. Дрор

  Природа Химия Биология (2023)

• Аллостерическая активация синтеза клеточной стенки во время роста бактерий

  • Ирина Шлосман
  • Элейн М. Фивенсон
  • Джозеф Дж. Лопаро

  Nature Communications (2023)

• Механизм специфичности гликоформ и защита in vivo с помощью антиафукозилированного нанотела IgG

  • Аарон Гупта
  • Кевин С.