Мойка кузова — Автомоечный комплекс Тайм 24
Мойка кузова
МОЙКА КУЗОВА — состоит из трех ФАЗ!
- Первая фаза (бесконтактная щелочная мойка) !
Убирает основную поверхностную грязь (частицы песка и земли), которую автомобиль собирает во время эксплуатации с дорог (битум, насекомые, смолы удаляются отдельной химией).
- Вторая фаза (ручная мойка) — плотные статические загрязнения
Часто после смывки пены первой фазы, на кузове остается белый налет, так называемая статическая грязь. Именно для удаления данных загрязнений применяется ручная мойка с использованием РН-нейтрального шампуня и крупнопористых губок. Также при помощи РН-нейтрального шампуня, нейтрализуется щелочь после 1-й фазы, которая, если её не удалять, со временем приводит к потускнению хромированных деталей и ЛКП кузова.
который постепенно вернёт блеск лакокрасочному покрытию и защитит его от агрессивной окружающей среды. На автомоечном комплексе Time применяются следующие составы:
- наноконсервант
- защитный полимер
- кварцевое покрытие
- твердый воск Carnauba
Кузов / экстерьер
1 — 2 категория
3 — 4 категория
5 — 6 категория
Двухфазная мойка без сушки
- двухфазная мойка
кузова - сушка
стекол снаружи
Двухфазная мойка кузова
- сушка кузова
- продувка
- чистка колес
1000 — 1150
трехфазная мойка кузова
- наноконсервант
- сушка кузова
- продувка
- чистка колес
1200 — 1300
Кварцевая защита кузова
- 1-я фаза
обезжиривание - 2-я фаза
- 3-я фаза – кварцевая защита
1600 — 1650
1700-1750
1800-1850
*Мойка кузова с коэффициентом 2 после бездорожья (Трофи-Трейд)
Защитные покрытия
1 — 2 категория
3 — 4 категория
5 — 6 категория
Наноконсервант
Защитный полимер
Кварцевое покрытие
обезжиривание мойка кузова
1600 — 1650
1700-1750
1800-1850
ТВЕРДЫЙ ВОСК CARNAUBA ЧИСТКА КУЗОВА
2500 — 2600
2700 — 2800
2900 — 3000
Чистка ковров
Чистка ковра салона
Чистка коврика багажника
Антидождь
1 категория
2 категория
3 категория
Экспресс-антидождь: входит передняя полусфера чистка стекла нанесение состава
антидождь на стекла: входит передняя полусфера чистка стекла нанесение состава
- АНТИДОЖДЬ или Гидрофобной покрытие стекла:
- придает обработанной поверхности сильные гидрофобные свойства
- обеспечивает лучшую видимость во время дождя или попадания под грязевую волну
- повышает безопасность движения и комфорт управления в сложных метеоусловиях
- Входит передняя полусфера
- обработка стекла микроабразивными очистителем с помощью меланованной губки
- обезжиривание поверхностей
- нанесение защитного состава
Мы пересмотрели технологию оказания услуги и внедрили двухфазную и трехфазную мойку, включающую в себя следующие этапы:
-
- Нанесение второй фазы из пенокомплекта шампуня для ручной мойки кузова авто с дальнейшим использованием крупноячеистой губки. Благодаря высокому содержанию положительно заряженных ионов обладает пленкообразующими свойствами в отношении отрицательно заряженных поверхностей кузова авто. Образуемая плёнка обладает антистатическими и водоотталкивающими свойствами, а также придает зеркальный блеск лакокрасочному покрытию.
- Покрытие кузова высокотехнологичным консервант-осушителем для защиты внешнего вида лакокрасочного покрытия и моментального разрыва водяной пленки, что позволяет значительно сократить время на сушку авто. Входящая в состав уникальная композиция из трех ухаживающих компонентов с коллоидным оксидом кремния (SiO2) и кополимерами обеспечивает невероятный уровень блеска и глубины цвета, мощные гидрофобные и антистатические свойства, а также эффект самоочищения поверхности.
- Сушка кузова микрофибровым полотенцем со специальным плетением «крученая петля», которое обеспечивает высокую впитываемость влаги. Благодаря данному свойству микрофибра великолепно собирает остатки влаги с поверхности кузова автомобиля после мойки.
Таким образом Двухфазный – трехфазный вариант имеет ряд очевидных преимуществ перед более простой, но далеко не совершенной, бесконтактной мойкой:
- нет необходимости в применении шампуней с агрессивным химическим составом, который наносит вред защитному слою ЛКП;
- при бесконтактной мойке часто превышается концентрация активного вещества, чтобы минимизировать количество статичной грязи;
- в отличие от бесконтактной мойки, при которой практически всегда остается часть загрязнений, двухфазная процедура гарантирует зеркальную чистоту кузова даже без протирки;
- протирка лакокрасочного покрытия после двухфазной – трехфазной мойки не влечет рисков, связанных с абразивным воздействием мелкозернистой грязи, остающейся после бесконтактной обработки шампунем.
Примеры мойки кузова у нас:
Назад
Далее
Автомойка в техцентре TRW
Автотехцентр TRW предлагает всем автолюбителям комплексный подход к обслуживанию автомобилей всех марок. Он включает не только всестороннюю диагностику, техосмотр и ремонт, но и качественную мойку машин. Мы располагаем тремя моечными постами, оборудованными по последнему слову техники. Работая круглосуточно, они готовы принять ваш автомобиль в любое время дня и ночи. В комплекс услуг по мойке автомобилей входит ручная или бесконтактная мойка кузова, двигателя, подкрылков и колес, стекол, а также чистка ковриков и удаление следов от насекомых.
Кроме того, мы производим химчистку салона, натирку кожаных сидений, чернение резины и т. д. Для вашего удобства в техцентре TRW работает бар, где всегда можно отдохнуть и выпить чашку кофе, пока наши мастера приводят ваш автомобиль в порядок. Таким образом, главными задачами нашей компании является быстрое и высококачественное обслуживание автомобилей, а также высокий уровень сервиса для клиентов, которые, как правило, становятся постоянными и рекомендуют нас своим друзьям и близким.
Услуга | 1 | 2 | 3 | 4 |
---|---|---|---|---|
отечественные автомобили,иномарки малого класса (седан) | универсалы, автомобили среднего и бизнес класса | автомобили предстовительского класса, паркетники, средне-размерные джипы, «каблучки» | микроавтобусы, внедорожники люкс-класса | |
1. Мойка кузова без шампуня и сушки (сбить грязь) | 200 | 250 | 300 | 350 |
1а. Мойка кузова с шампунем без сушки | 300 | 350 | 400 | 450 |
2. Мойка кузова бесконтактная | 400 | 450 | 550 | 650 |
3. Мойка ковриков резиновых (за 4 шт.) | 100 | 150 | 150 | 150 |
4. Чистка ковриков матерчатых (за 4 шт.) | 100 | 150 | 150 | 150 |
5. Стекла (изнутри) | 200 | 250 | 300 | 350 |
6. Пластик (внутри салона) | 200 | 250 | 300 | 350 |
7. Пылесос салона (без ковриков) | 200 | 250 | 300 | 350 |
Комплексная мойка (со 2-го по 7-й пункт включительно) | 1000 | 1200 | 1400 | 1700 |
8. Мойка подкрылков (за 4 шт.) | 100 | 100 | 100 | 150 |
9. Удаление наледи из колесных арок (за 4 шт.) | 100 | 100 | 100 | 150 |
10. Мойка колес изнутри (за 1 шт.) | 100 | 100 | 100 | 100 |
11. Продувка сжатым воздухом (замки, личинки, дворники, зеркала) | 100 | 150 | 150 | 250 |
12. Продувка сжатым воздухом всей машины | 100 | 100 | 100 | 150 |
13. Смазка замков (WD-40) | 100 | 100 | 100 | 100 |
14. Обработка силиконом | 100 | 120 | 150 | 150 |
15. Влаговпитывающий коврик (2 шт.) | 100 | 100 | 100 | 100 |
ЗИМНЯЯ комплексная мойка (со 2-го по 16-й пункт включительно) | 1600 | 1850 | 2100 | 2550 |
16. Пылесос салона (без ковриков) ОС3* | 400 | 490 | 590 | 690 |
17. Пылесос багажника | от 150 | от 150 | от 200 | от 200 |
18. Пылесос багажника ОС3* | от 300 | от 300 | от 400 | от 400 |
19. Натирка кожаных сидений (цена за 1 сидение) | 150 | 200 | 250 | 250 |
20. Мойка двигателя (в зависимости от загрязнения) | от 400 | от 500 | от 500 | от 500 |
21. Удаление следов от мошек и насекомых | от 100 | от 100 | от 200 | от 200 |
22. Удаление битумных пятен или мовиля | от 1000 | от 1000 | от 1100 | от 1100 |
23. Обработка стекол средством «антидождь» | 700 | 800 | 800 | 800 |
24. Полировка кузова (защитная) | 900 | 1000 | 1100 | 1200 |
25. Обработка кузова воском | 200 | 200 | 300 | 300 |
26. Чернение резины (4 шт.) | 150 | 150 | 200 | 200 |
27. Чернение бамперов (перед./зад.) | 150 | 150 | 200 | 200 |
28. Химчистка салона | от 6000 | от 8000 | от 9000 | от 10000 |
29. Химчистка багажника | от 600 | от 800 | от 900 | от 900 |
30. Химчистка сидений кожа/ткань (за 1 шт) | от 300/600 | от 300/600 | от 400/800 | от 450/900 |
31. Химчистка пола | от 1000 | от 1300 | от 1500 | от 1600 |
32. Химчистка дверей (за 1 шт) | от 350 | от 350 | от 400 | от 450 |
33. Химчистка потолка | от 1300 | от 1400 | от 1500 | от 1500 |
34. Химчистка пластика | от 1000 | от 1100 | от 1200 | от 1500 |
35. Химчистка литых дисков (1 шт) | от 200 | от 200 | от 200 | от 250 |
*ОСОБО СИЛЬНЫЕ ЗАГРЯЗНЕНИЯ
Внимание!
- Принадлежность Вашего автомобиля к различным категориям смотрите в приложении.
- Цены на некоторые работы оговариваются отдельно с администратором мойки.
- Администрация не несет ответственности за работу узлов и агрегатов автомобиля после их мойки.
- Администрация не несет ответственности за состояние лакокрасочного покрытия после мойки (воздействие химического состава моющих средств).
- Администрация не несет ответственности за пропажу вещей и ценностей, оставленных в автомобиле.
ПРИЛОЖЕНИЕ-КЛАССИФИКАЦИЯ
1 | Отечественные автомобили, иномарки малого класса (седан) | LADA, Москвич, ИЖ, Таврия, ОКА, Audi А1/A2, Chevrolet Spark/Aveo/Lanos/Lacetti/Cobalt, Citroen С1/C2/C3/С4, Daewoo Matiz/Nexia, Fiat Albea/500, Ford Focus/Fiesta/Fusion, Honda Jazz/Сivic, Hyundai I10/Accent/Getz/Solaris, Kia Picanto/Rio/Spectra/Cerato, Mazda 2, Mitsubishi Colt/i-MiEV, Nissan Micra/Note/Almera/Tiida, Opel Corsa, Peugeot 107/108/206/207/208, Renault Clio/Logan/Sandero/Simbol, Smart, Seat Cordoba/Ibiza, Skoda Citigo/Fabia/Rapid, Suzuki Swift/Splash, Toyota Yaris/Auris, Volkswagen Polo/Polo Sedan/Lupo. |
---|---|---|
2 | Универсалы, автомобили среднего и бизнес-класса | Audi A3/A4/А5/A6, BMW 1 Series/2 Series/3 Series/4 Series/5 Series/Z4/I8, Cadillac BLS/CTS/СТ5, Chevrolet Epica/Rezzo/Cruze, Chrysler PT Cruiser/Sebring, Citroen C5/C6/C-Elysee/DS5, Dodge Caliber/Avenger/Viper, Fiat Croma/Bravo/Panda, Ford Mondeo/Mustang, Honda Accord/Legend/Crosstour, Hyundai Elantra/Coupe/Sonata/NF/Grandeur/I30, Infiniti M/G, Jaguar XE/X-Type/S-Type/XK, Kia Stinger/K5/Magentis/Opirus/Optima/Ceed/, Lexus GS/ IS/SC/ES, Mazda 3/6/RX-8, Mercedes A-Class/B-Class/C-Class/CLC/CLK/E-Class/CLS/CLA/SLK/A-Class NEW, Mini Cooper, Mitsubishi Lancer/Galant, Nissan Teana/350Z, Opel Insignia/Astra/Vectra, Peugeot 308/407/508/607/3008/408, Renault Megane/Laguna/Vel Satis/Latitude/Fluence/Talisman, Saab 9-3/9-5, Skoda Octavia/Superb, Suzuki SX4/Liana/Kizashi, Subaru Impreza/Legacy, Toyota Corolla/Avensis/Camry/Prius, Volkswagen Arteon/Golf/Jetta/Eos/Passat/Scirocco, Volvo C30/ S40/V50/S60/V40. |
3 | Автомобили представительского класса, паркетники, среднеразмерные джипы, «каблучки» | Audi A8/A7/R8/Q3/Q5/Allroad, Bentley Bentayga/Continetal/Mulsanne/BMW 6 Series/7 Series/Х1/X3/X4/GT, Cadillac SRX, Chevrolet Captiva/Niva/Orlando, Chrysler Voyager/300C/300М, Citroen Xsara Picasso/Grand C4 Picasso/Berlingo/C-Crosser, Dodge Nitro, Ford Tourneo/S-Max/C-Max/Kuga/EcoSport/Maverick, Honda CR-V/HR-V, Hyundai Creta/Tucson/Santa Fe/ix35/I40/Equus/Genesis, Infiniti EX/Q/QX, Jaguar XF/XJ/E-Pace, Jeep Wrangler/Grand Cherokee/Liberty, Kia Carens/Carnival/Sorento/Sportage/Quoris/Seltos/K900, Land Rover Freelander/Evoque, Lexus LS/NX, Mercedes S-Class/SLR/CL/GLB/GLK/GLC/GLA/Citan, Mazda CX-3/CX-30/CX-5/CX-7/CX-9/Tribute, Mitsubishi Outlander/ASX/Eclipse Cross, Nissan X-Trail/ Murano/Juke/Qashqai, Opel Meriva/Zafira/Antara/Mokka, Peugeot Partner/4007/5008, Porsche Boxster/Cayman/911, Renault Koleos/Kangoo/Scenic/Duster/Arkana/Kaptur/Dokker, Skoda Roomster/Praktik/Yeti/Karoq/Kodiaq, Subaru Forester/Outback/XV, Suzuki Grand Vitara/Jimny, Toyota RAV4/Verso, Volkswagen Tiguan/Touran/Caddy/Phaeton/Taos, Volvo ХС40/ XC60/XC70/S80/S90/V90. |
4 | Микроавтобусы, внедорожники люкс-класса | Audi Q7/Q8, BMW X5/X6/Х7, Cadillac Escalade, Chevrolet TrailBlazer/Tahoe/Suburban, Ford Explorer/Ranger/Expedition/F-150, Honda Pilot, Hyundai Palisade/ix55/Starex (H-1)/Galloper/Terracan, Infiniti FX/QX, Hummer h2/h3/h4, Jeep Commander, KIA Mohave, Land Rover Defender/Discovery/Discovery Sport/Range Rover/Range Rover Sport/Velar, Lexus LX/RX/GX/JX, Mazda BT-50, Mercedes Maybach S-Class/Maybach GLS-Class/GLS-Class/GLE-Class/G-Class/M-Class/GL-Class/R-Class/V-Class/SLS/X-Class, Mitsubishi Pajero/L-200/Pajero Sport, Nissan Patrol/Pathfinder/Navara/GT-R, Peugeot Traveller, Porsche Cayenne/Panamera/Macan/Taycan, SsangYong Actyon/Kyron/Rexton/Rodius, Subaru Tribeca, Toyota Alphard/Land Cruiser/Hilux/Highlander/4Runner, Volkswagen Multivan/Touareg/Amarok, Volvo XC90. |
Примечание: классификация автомобилей составлена на основании автомобильного сайта drive.ru Уважаемые клиенты! Обо всех своих пожеланиях и претензиях по работе автомоечного комплекса Вы можете сообщать по тел.: (499) 431-75-66 |
Комплекс WASH, эндосомальный активатор Arp2/3, взаимодействует с комплексом синдрома Германского-Пудлака BLOC-1 и его карго-фосфатидилинозитол-4-киназой типа IIα
. 2013 июль; 24 (14): 2269-84. doi: 10.1091/mbc.E13-02-0088. Epub 2013 15 мая.П. В. Райдер 1 , Р. Вистейн, А. Гокхале, М. Н. Симан, М. А. Путенведу, В. Фаундез
Принадлежности
принадлежность
- 1 Кафедра клеточной биологии, Университет Эмори, Атланта, Джорджия 30322, США.
- PMID: 23676666
- PMCID: PMC3708732
- DOI: 10.1091/mbc.E13-02-0088
П.В. Райдер и соавт. Мол Биол Селл. 2013 июль
Бесплатная статья ЧВК . 2013 июль; 24 (14): 2269-84. doi: 10.1091/mbc.E13-02-0088. Epub 2013 15 мая.Авторы
П. В. Райдер 1 , Р. Вистейн, А. Гокхале, М. Н. Симан, М. А. Путенведу, В. Фаундез
принадлежность
- 1 Кафедра клеточной биологии, Университет Эмори, Атланта, Джорджия 30322, США.
- PMID: 23676666
- PMCID: PMC3708732
- DOI: 10.1091/mbc.E13-02-0088
Абстрактный
Компоненты механизма биогенеза везикул, такие как белки оболочки, могут взаимодействовать с актиновым цитоскелетом для сортировки грузов по множеству путей. Однако неизвестно, являются ли эти взаимодействия общим требованием для разнообразных маршрутов транспорта эндосом. В этом исследовании мы идентифицируем актиновые регуляторы цитоскелета как ранее неизвестные интеракторы комплексов, связанных с синдромом Германского-Пудлака. Два комплекса, мутировавшие при синдроме Германски-Пудлака, комплекс адапторного белка-3 и комплекс биогенеза связанных с лизосомами органелл-1 (BLOC-1), взаимодействуют с липидкиназой фосфатидилинозитол-4-киназой типа IIα (PI4KIIα) и регулируются ею. . Поэтому мы предположили, что PI4KIIα взаимодействует с новыми регуляторами этих комплексов. Чтобы проверить эту гипотезу, мы иммуноаффинно очистили PI4KIIα из меченных изотопами клеточных лизатов, чтобы количественно идентифицировать взаимодействующие вещества. Поразительно, выделение PI4KIIα преимущественно совместно обогащает белки, которые регулируют актиновый цитоскелет, включая факторы обмена гуанина для GTPases семейства Rho, такие как RhoGEF1 и несколько субъединиц комплекса WASH. Мы биохимически подтвердили некоторые из этих взаимодействий PI4KIIα. Важно отметить, что истощение комплекса BLOC-1, комплекса WASH, RhoGEF1 или PI4KIIα изменяет содержание и/или внутриклеточное распределение чувствительных к BLOC-1 грузов PI4KIIα, ATP7A и VAMP7. Мы заключаем, что комплекс синдрома Германского-Пудлака BLOC-1 и его груз PI4KIIα взаимодействуют с регуляторами актинового цитоскелета.
Цифры
РИСУНОК 1:
Интерактом PI4KIIα обогащает актин-регуляторные…
РИСУНОК 1:
Интерактом PI4KIIα обогащает актин-регуляторные белки. (A) PI4KIIα был очищен иммуноаффинно из сшитого DSP…
РИСУНОК 1:Интерактом PI4KIIα обогащает актин-регуляторные белки. (A) PI4KIIα был очищен иммуноаффинно из гомогенатов клеток нейробластомы с перекрестно сшитыми DSP SHSY-5Y. PI4KIIα и сопутствующие белки были разделены с помощью SDS-PAGE и окрашены серебром (дорожка 5). Некоторые полипептиды отсутствуют в контролях, которые включают покрытые антителами шарики без лизата (дорожка 3) или инкубации, в которых был включен избыток антигенного пептида PI4KIIα (дорожка 4). Элюцию гранул проводили буфером для образцов Лэммли (дорожки 3–5). На дорожках 6 и 7 показаны элюаты антигенных пептидов из шариков, сходные с таковыми на дорожках 4 и 5. Иммуноаффинная очистка позволила селективно элюировать PI4KIIα-коизолирующие белки на низком фоне (сравните дорожки 6 и 7; дорожки 6′ и 7′ изображают контрастные улучшенные дорожки 6 и 7). Стрелкой отмечена полоса, содержащая PI4KIIα. Серебряное пятно является репрезентативным изображением двух независимых экспериментов. Внизу: иммуноблот PI4KIIα в параллельном наборе анализов, как и в окрашенном серебром SDS-PAGE. Цепи иммуноглобулина G отмечены звездочками. Ввод составляет 1 и 0,33% для иммунопреципитации и иммуноаффинной очистки соответственно. (B) Графики представляют PI4KIIα и соочищающие белки (подробности см. В дополнительной таблице S1). 9Оси 0089 x и y показывают кратность обогащения SILAC и общее количество спектральных отсчетов, использованных для идентификации белка, соответственно. Ссылочными точками отмечены PI4KIIα (зеленый) и Nedd4-1. (C) Бирюзовые и красные точки выделены родственными актину белками, коизолированными с PI4KIIα. К ним относятся коэффициенты обмена ВВП RhoGEF1, DOCK7 и GEF-h2. Красные точки обозначают родственные актину белки, которые являются субъединицами или взаимодействующими элементами комплекса WASH: струмпеллин (KIAA0196), SWIP (KIAA1033), Fam21B, FKBP15, кэпирующий белок α и кэпирующий белок β. (D) Синими точками отмечены белки, связанные с переносом через мембрану, совместно изолированные с PI4KIIα, включая тяжелую цепь клатрина (CLTC), динамин-2 (DNM2) и субъединицу β3A комплекса AP-3 (AP3B1). (E) Функциональный анализ аннотаций идентифицированных белков с использованием аннотаций Gene Ontology выявил преобладание белков, связанных с актином. Обогащение таких категорий, как цитоскелет (30/124 взаимодействующих) и актиновый цитоскелет (13/124), было значительным в 9 лет.0089 p = 1,62 × 10 −7 и 7,67 × 10 −7 соответственно. Подробности см. в дополнительной таблице S2. (F) Сетевой анализ предполагаемых компонентов интерактома PI4KIIα и субъединиц BLOC-1. PI4KIIα (зеленый), субъединицы BLOC-1 (синий) и субъединицы комплекса WASH (красный) выделены.
РИСУНОК 2:
Биохимическое подтверждение белков, взаимодействующих с PI4KIIα.…
РИСУНОК 2:
Биохимическое подтверждение белков, взаимодействующих с PI4KIIα. (A) PI4KIIα был очищен иммуноаффинно из несшитого (нечетное…
ФИГУРА 2:Биохимическое подтверждение белков, взаимодействующих с PI4KIIα. (A) PI4KIIα был очищен иммуноаффинно из несшитых (нечетные дорожки) и сшитых DSP (четные дорожки) экстрактов клеток нейробластомы SHSY-5Y, растворимых в детергенте. Иммунные комплексы разделяли с помощью SDS-PAGE и анализировали с помощью иммуноблота с антителами против PI4KIIα, тяжелой цепи клатрина (CHC), паллидина, пероксиредоксина-1 (Prdx-1), RhoGEF1, Dock7 и субъединицы комплекса WASH струмпеллин и Nedd4-1. Коизолирующие белки не были обнаружены в контрольных реакциях, где был включен избыток антигенного пептида PI4KIIα, чтобы превзойти эндогенный PI4KIIα (дорожки 4 и 5). На дорожке 3 показаны шарики, покрытые антителами, инкубированные в отсутствие клеточного лизата. Входы составляют 0,25%. (Б) HEK29Клетки 3T, временно экспрессирующие HA-меченый PI4KIIα, подвергали поперечному сшиванию DSP (дорожки 3 и 4), а растворимые в детергенте экстракты подвергали иммунопреципитации антителами HA. Иммунные комплексы разделяли с помощью SDS-PAGE и анализировали с помощью иммуноблоттинга с указанными антителами. RhoGEF1 присутствует в иммунопреципитациях HA (дорожка 3), но не присутствует в пептидных контрольных препаратах (дорожка 4). На дорожке 2 показаны шарики, покрытые антителами, инкубированные в отсутствие клеточного лизата. Входные данные представляют собой 0,5%, и n = 3. (C, D) Клетки SHSY-5Y, стабильно экспрессирующие FLAG-меченую субъединицу комплекса BLOC-1 (дисбиндин), инкубировали в отсутствие (D, дорожки 1, 4, и 6) или присутствие (C, все дорожки и D, дорожки 2, 5 и 7) сшивающего агента DSP, и экстракты, растворимые в детергенте, иммунопреципитировали антителами против PI4KIIα (C) или эпитопа FLAG (D). Иммунные комплексы разрешали методом SDS-PAGE и анализировали методом иммуноблоттинга с антителами к указанным белкам, идентифицированным в интерактоме PI4KIIα. Также включены два мембранных белковых груза BLOC-1, v-SNARE VAMP7 и переносчик меди болезни Менкеса ATP7A. Как и в A и B, контролями являются антигенные пептиды вне конкуренции (C, дорожка 4 и D, дорожки 6 и 7). На дорожках C2 и D3 показаны шарики, покрытые антителами, инкубированные в отсутствие клеточного лизата. Входы составляют 0,5%.
РИСУНОК 3:
Генетическое подтверждение белков, взаимодействующих с PI4KIIα.…
РИСУНОК 3:
Генетическое подтверждение белков, взаимодействующих с PI4KIIα. (A, D) Клетки HEK293T обрабатывали скремблом…
РИСУНОК 3:Генетическое подтверждение белков, взаимодействующих с PI4KIIα. (А, Г) HEK29Клетки 3T обрабатывали контрольной миРНК скремблирования или миРНК, нацеленной на PI4KIIα. (B, D) Клетки HEK293T обрабатывали лентивирусами, несущими контрольную скрамбл-кшРНК или кшРНК, нацеленную на паллидин или мутированные субъединицы комплекса BLOC-1. (C, E) Клетки меланомы человека MNT-1 обрабатывали лентивирусами, несущими контроль скрембл-кшРНК или кшРНК, нацеленными на субъединицу BLOC-1 паллидин, RhoGEF1 или субъединицу комплекса WASH струмпеллин. Лизаты клеток HEK293T и MNT-1 разделяли с помощью SDS-PAGE, а общее клеточное содержание представляющих интерес белков измеряли с помощью полуколичественного иммуноблота. На диаграммах D и E показаны количественные оценки, где целевой белок выделен синим цветом, а значительно измененные антигены отмечены красным. Серая заливка представляет 50–100% контроля. Все эксперименты проводились в трех биологических повторах, по крайней мере, с одним определением в каждой повторности. Значимый 9Все значения 0089 p составляют <0,025 и были определены с помощью непараметрического анализа с использованием группового критерия суммы рангов Краскела-Уоллиса с последующим критерием суммы рангов Уилкоксона-Манна-Уитни. Субъединицу AP-3 β3A (D) и Hsp90 (D, E) использовали в качестве контроля для сравнения.
РИСУНОК 4:
PI4KIIα, субблок комплекса WASH…
РИСУНОК 4:
PI4KIIα, субъединица комплекса WASH струмпеллин и компоненты актинового цитоскелета соприкасаются на ранней стадии…
РИСУНОК 4:PI4KIIα, субъединица WASH-комплекса струмпеллин и компоненты актинового цитоскелета находятся рядом с ранними эндосомами. (A, B) Клетки HEK293T были гомогенизированы, и низкоскоростные супернатанты были разрешены с помощью скоростной седиментации сахарозы в градиенте сахарозы 10–45%. PI4KIIα и субъединица комплекса WASH струмпеллин совместно осаждаются на 35% сахарозе с эндосомальными органеллами, что определяется рецептором трансферрина (TrfR). Цитозольные фракции осаждаются в верхней части градиента (10% сахароза). (B) Относительное распределение указанных белков для фракционирования, показанного на A. Изображения и профиль распределения являются репрезентативными для двух независимых экспериментов. ( C ) Визуализация живых клеток флуоресцентно помеченных PI4KIIα и LifeAct для визуализации филаментозного актина в HEK29.Клетки 3Т подтвердили наличие актина в PI4KIIα-положительных органеллах ( n = 12 клеток). (D) Клетки HEK293T, стабильно экспрессирующие PI4KIIα-GFP и β2-адренергические рецепторы, меченные Signal-Sequence FLAG (SSF-B2AR), временно трансфицировали mCortactin-dsRed и визуализировали через 10 минут после добавления 10 мкМ изопротеренола. Одиночный конфокальный стек был захвачен в трех каналах с интервалом в 1 с. (E) Расширенное изображение эндосомы, обозначенное стрелкой в A, за 10-секундный период. (F) Схема овального профиля, используемого для создания следов интенсивности флуоресценции вокруг эндосом. (G) Репрезентативный след нормализованной интенсивности флуоресценции для каждого белка в эндосоме выше.
РИСУНОК 5:
PI4KIIα совместно с WASH…
РИСУНОК 5:
PI4KIIα колокализуется с комплексом WASH. (A, C) Клетки HEK293T были временно…
РИСУНОК 5:PI4KIIα колокализуется с комплексом WASH. (A, C) Клетки HEK293T либо временно трансфицировали меченными EGFP субъединицами комплекса WASH, либо окрашивали зеленым MitoTracker, фиксировали и обрабатывали для непрямой иммунофлуоресцентной микроскопии. Изображения были получены с помощью микроскопии деконволюции высокого разрешения. z — показаны проекции стека. (B, D) Визуализация изоповерхности данных z , созданных с помощью программного обеспечения Imaris. (E) Расчет коэффициента корреляции Пирсона между интенсивностью сигнала струмпеллина-EGFP, WASH-EGFP или MitoTracker и эндогенного PI4KIIα. Корреляция терялась при повороте одного канала на 15°. Здесь n = 6 для WASH-EGFP, n = 7 для струмпеллина-EGFP и n = 9 для MitoTracker-A488. Статистические сравнения были выполнены с помощью непараметрического анализа с использованием группового критерия суммы рангов Краскела-Уоллиса с последующим индивидуальным критерием суммы рангов Уилкоксона-Манна-Уитни.
РИСУНОК 6:
Истощение паллидина и штрумпеллина…
РИСУНОК 6:
Истощение паллидина и струмпеллина изменяет морфологию эндосом. (A) Клетки HEK293T, стабильно экспрессирующие…
РИСУНОК 6:Истощение паллидина и струмпеллина изменяет морфологию эндосом. (А) HEK29Клетки 3T, стабильно экспрессирующие β2-адренергические рецепторы, помеченные Signal-Sequence FLAG (SSF-B2AR) и PI4KIIα-EGFP, трансдуцировали лентивирусами скремблированной, паллидиновой или струмпеллиновой кшРНК. Клетки, обедненные паллидином, визуализировали через 8 дней после начала трансдукции, а клетки, обедненные струмпеллином, визуализировали через 5 дней после трансдукции. Клетки выращивали в условиях селекции после 2-х суток трансдукции. Все нокдауны сравнивали с параллельной трансдукцией скремблированной кшРНК. Изображения представляют собой максимальные проекции трех конфокальных срезов, сделанных с интервалом 0,3 мкм. (B) Частотная гистограмма окружности эндосом клеток, обработанных скремблированной (синий) или паллидиновой (красный) кшРНК. Вставка слева изображает вероятностный график тех же данных. p Значение , определенное непараметрическим критерием Колмогорова–Смирнова. Здесь n = 150 для контрольных клеток и n = 117 для истощенных по паллидину клеток. (C) Процент клеток, экспрессирующих скремблированную или струмпеллиновую кшРНК, демонстрирующую эндосомальные тубуляции. Селекцию клеток проводили в канале SSF-B2AR и ослепляли для PI4KIIα перед интернализацией антитела FLAG, затем визуализировали через 15 минут после добавления 10 мкМ изопротеренола. Значение p определяли с помощью непараметрического точного критерия Фишера. Здесь n = 112 для контрольных клеток и n = 101 для истощенных по паллидину клеток.
РИСУНОК 7:
Истощение комплекса ВСГ изменяет…
РИСУНОК 7:
Истощение комплекса WASH изменяет внутриклеточное распределение грузов BLOC-1. (A) Меланома MNT1…
РИСУНОК 7: Истощение комплексаWASH изменяет внутриклеточное распределение грузов BLOC-1. (A) Клетки меланомы MNT1 обрабатывали кшРНК, направленной против струмпеллиновой субъединицы комплекса WASH или скрембл-контроля. Белки клеточной поверхности метили поверхностным биотинилированием и выделяли с помощью стрептавидиновых гранул. Репрезентативные иммуноблоты показывают увеличение поверхностного содержания ATP7A и Vamp7, двух грузов BLOC-1, при истощении комплекса WASH. (B) Рецептор трансферрина (TrfR) измеряли в качестве контроля. Окрашивание выделенных белков серебром не выявило глобального снижения содержания белков на клеточной поверхности (сравните дорожки 5 и 6). (C) Количественные оценки поверхностной экспрессии белков, представляющих интерес, при истощении комплекса WASH по сравнению с контролем скремблирования. Данные являются средними ± SEM. Мы обнаружили значительное увеличение грузов BLOC-1 ATP7A и Vamp7 в 3,3 ± 0,8 раза и 2,5 ± 0,6 раза соответственно. Рецептор трансферрина существенно не изменился. 9Значение 0089 p определяли с помощью непараметрического критерия суммы рангов Уилкоксона-Манна-Уитни. Было n = 8 определений из четырех независимых экспериментов.
См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC
Похожие статьи
- Белковые комплексы синдрома Германски-Пудлака связаны с фосфатидилинозитол-4-киназой типа II альфа в нейрональных и ненейрональных клетках.
Салазар Г., Златич С., Крейдж Б., Педен А.А., Пол Дж., Фаундез В. Салазар Г. и др. Дж. Биол. Хим. 2009 16 января; 284 (3): 1790-802. doi: 10.1074/jbc.M805991200. Epub 2008 14 ноября. Дж. Биол. Хим. 2009. PMID: 1
79 Бесплатная статья ЧВК. - Фосфатидилинозитол-4-киназа типа II альфа содержит AP-3-сортирующий мотив и киназный домен, которые оба необходимы для движения эндосом.
Крейдж Б., Салазар Г., Фаундез В. Крейдж Б. и соавт. Мол Биол Селл. 2008 апр; 19(4):1415-26. doi: 10.1091/mbc.e07-12-1239. Epub 2008 6 февраля. Мол Биол Селл. 2008. PMID: 18256276 Бесплатная статья ЧВК.
- Идентификация интерактома пальмитоилированного мембранного белка, фосфатидилинозитол-4-киназы II альфа.
Гокхале А., Райдер П.В., Златич С.А., Фаундез В. Гокхале А. и др. Методы Мол Биол. 2016;1376:35-42. дои: 10.1007/978-1-4939-3170-5_4. Методы Мол Биол. 2016. PMID: 26552673 Бесплатная статья ЧВК.
- Строительные БЛОКИ лизосом и связанных с ними органелл.
Делл Анжелика ЕС. Делл’Анжелика ЕС. Curr Opin Cell Biol. 2004 авг; 16 (4): 458-64. doi: 10.1016/j.ceb.2004.05.001. Curr Opin Cell Biol. 2004. PMID: 15261680 Обзор.
- Rab38 Мутация и фенотип легких.
Осанаи К. Осанай К. Int J Mol Sci. 2018 27 июля; 19 (8): 2203. дои: 10.3390/ijms19082203. Int J Mol Sci. 2018. PMID: 30060521 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
Посмотреть все похожие статьи
Цитируется
- PI(4,5)P2-зависимая и -независимая роль PI4P в регуляции секреции гормонов клетками гипофиза.
Стоилкович С.С., Балла Т. Стоилкович С.С. и соавт. Фронт Эндокринол (Лозанна). 2023 27 января; 14:1118744. doi: 10.3389/fendo.2023.1118744. Электронная коллекция 2023. Фронт Эндокринол (Лозанна). 2023. PMID: 36777340 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
- Перекрывающиеся механизмы в торговле органеллами, связанными с лизосомами: урок редких мультисистемных расстройств.
Бануши Б., Симпсон Ф. Бануши Б. и др. Клетки. 2022 21 ноября; 11 (22): 3702. doi: 10.3390/ячейки11223702. Клетки. 2022. PMID: 36429129 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
- PI4P и BLOC-1 ремоделируют эндосомальные мембраны в канальцы.
Яни Р.А., Ди Чикко А., Керен-Каплан Т., Вале-Коста С., Хамауи Д., Хурбейн И., Цай Ф.К., Ди Марко М., Масе А.С., Чжу Ю., Аморим М.Дж., Бассеро П., Бонифачино Х.С., Субтил А., Маркс М.С., Леви Д., Рапозо Г., Делевое К. Яни Р.А. и соавт. Джей Селл Биол. 2022 7 ноября; 221(11):e202110132. doi: 10.1083/jcb.202110132. Epub 2022 28 сентября. Джей Селл Биол. 2022. PMID: 36169638 Бесплатная статья ЧВК.
- ER как главный регулятор мембранного транспорта и функции органелл.
Венцель Э. М., Эльфмарк Л.А., Стенмарк Х., Райборг К. Венцель Э.М. и соавт. Джей Селл Биол. 2022 3 октября; 221(10):e202205135. doi: 10.1083/jcb.202205135. Epub 2022 15 сентября. Джей Селл Биол. 2022. PMID: 36108241 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
- Белки семейства WASP: молекулярные механизмы и последствия для болезней человека.
Крамер Д.А., Пайпер Х.К., Чен Б. Крамер Д.А. и соавт. Eur J Cell Biol. 2022 июнь-август;101(3):151244. doi: 10.1016/j.ejcb.2022.151244. Epub 2022 1 июня. Eur J Cell Biol. 2022. PMID: 35667337 Бесплатная статья ЧВК.
Просмотреть все статьи «Цитируется по»
Рекомендации
- Айтталеб М., Богут К.А., Тесмер Дж.Дж. Структура и функция гетеротримерных факторов обмена гуаниновых нуклеотидов Rho, регулируемых G-белком. Мол Фармакол. 2010;77:111–125. — ЧВК — пабмед
- Анитей М., Хофлак Б. Мостовая мембрана и динамика цитоскелета в секреторных и эндоцитарных путях. Nat Cell Biol. 2012; 14:11–19. — пабмед
- Anitei M, Stange C, Parshina I, Baust T, Schenck A, Raposo G, Kirchhausen T, Hoflack B. Белковые комплексы, содержащие CYFIP/Sra/PIR121, координируют передачу сигналов Arf1 и Rac1 во время биогенеза носителя, покрытого клатрином-AP-1, в TGN . Nat Cell Biol. 2010;12:330–340. — ЧВК — пабмед
- Балла А., Туйметова Г., Баршишат М., Гейст М., Балла Т. Характеристика изоформ фосфатидилинозитол-4-киназы II типа выявляет связь ферментов с эндосомальными везикулярными компартментами. Дж. Биол. Хим. 2002; 277:20041–20050. — пабмед
- Барилко Б., Влодарски П. , Биннс Д.Д., Гербер С.Х., Эрнест С., Судхоф Т.С., Гричин Н., Альбанези Дж.П. Анализ каталитического домена фосфатидилинозитол-4-киназы II типа. Дж. Биол. Хим. 2002; 277:44366–44375. — пабмед
Типы публикаций
термины MeSH
- 9 0367
вещества
Грантовая поддержка
- P30NS055077/NS/NINDS NIH HHS/США
- R56 NS042599/NS/NINDS NIH HHS/США
- R01 NS042599/NS/NINDS NIH HHS/США
- F31NS0765/NS/NINDS NIH HHS/США
- GM077569/GM/NIGMS NIH HHS/США
- R01 GM077569/GM/NIGMS NIH HHS/США
- 100140/Wellcome Trust/Великобритания
- G0701444/MRC_/Совет по медицинским исследованиям/Великобритания
- P30 NS055077/NS/NINDS NIH HHS/США
- T32 GM008169/GM/NIGMS NIH HHS/США
- NS42599/NS/NINDS NIH HHS/США
Три вещи, которые жители ищут в прачечных жилого комплекса
6 марта 2023 г. | Опыт с прачечной
Прачечные многоквартирного дома являются неотъемлемой частью управления недвижимостью. Как скажет вам любой житель, прачечная — одно из самых важных удобств, и каждый, кто снимает жилье, учитывает это при выборе жилья. Но на что именно обращают внимание жители, выбирая жилой комплекс с отличной прачечной? Давайте посмотрим на три наиболее важные вещи.
Удобство для жильцов
Удобство играет ключевую роль при выборе жилья, в том числе и в прачечной. Жители хотят иметь легкий доступ к стиральным и сушильным машинам, не отвлекаясь и не ожидая слишком долго в очереди. Они также ценят наличие достаточного количества машин, чтобы им не приходилось ждать, пока другие закончат свою загрузку. Инвестиции в энергоэффективные машины со стиральными и сушильными машинами большей вместимости могут повысить удобство для ваших арендаторов и обеспечить удовлетворение всех потребностей.
Система оплаты картой для прачечной
Наличие карт для стирки в качестве варианта оплаты стирки — еще один способ максимально упростить процесс для арендаторов. Средства можно добавлять на карту прачечной с помощью мобильного приложения LaundryConnect™ от Automatic Laundry, поэтому жильцам больше не нужно будет искать монеты каждый раз, когда они хотят постирать свою одежду.
Удобства в прачечной
Помимо доступа к стиральным и сушильным машинам, жильцы также ценят удобства, облегчающие и ускоряющие стирку. Это включает в себя такие вещи, как складные столики, стойки для сушки одежды, зарядные станции для электронных устройств и отсеки для хранения моющих средств или других предметов. Наличие таких удобств в прачечной может стать большим плюсом для потенциальных арендаторов, когда придет время принимать решение о том, в каком жилом комплексе они хотят жить.
Охрана
Безопасность всегда имеет первостепенное значение при выборе жилого комплекса с отличной прачечной, поэтому важно убедиться, что вы серьезно относитесь ко всем мерам безопасности. Это включает в себя установку камер, обеспечение того, чтобы двери были заперты в нерабочее время, обеспечение яркого освещения во всем пространстве и инвестиции в надежные замки на всех машинах.