7Сен

Вискомуфта газель: Автомобильные объявления — Доска объявлений

Содержание

Точка кипения. ГАЗ — журнал За рулем

Точка кипения. ГАЗ

Мы продолжаем сериал о болячках одной из самых популярных российских машин. Разобравшись в последней публикации с недостатками топливной системы, сегодня переходим к системе охлаждения. Несмотря на простую и проверенную временем конструкцию, она регулярно преподносит владельцам «Газели» неприятные сюрпризы…

На первый-второй

То, что автомобили ГАЗ-2705 кипят с момента своего появления на свет, далеко не новость. Как только не выкручивались их водители жарким летом: и печку включали, и капот снимали, и даже двигатель вырубали на ходу (что отнюдь не безопасно)! 

Основная причина перегрева — маленькая производительность однорядного радиатора, который устанавливался на автомобили с 1994 года. При температуре воздуха +25 оС он работает уже на пределе возможностей. Если же машина снабжена кондиционером или гидроусилителем, пиши пропало! «Газель» гарантированно вскипит, как говорится, за отрицательное время.

В 2000 году завод внял мольбам потребителей и авто получило двухрядные радиаторы. Проблема была решена. Двигатели 405-го семейства объемом 2,5 л, пришедшие на смену видавшему виды 406-му в конце 2005 года, комфортно себя чувствуют при температуре охлаждающей жидкости до 100 оС. Температурный ценз повысили в целях улучшения топливной экономичности. Мотор действительно отличается весьма умеренным аппетитом, а главное — водители таких «Газелей» начинают потихоньку забывать о перегреве… Увы, после 2006 года машина вновь получила однорядный радиатор. В противостоянии «прогресс — рыночная экономика» верх взяла последняя. В целях удешевления производства завод предпочел перегрев.

Двойной стандарт

Следование европейским законодателям мод уже не раз выходило боком отечественным автопроизводителям. Предписания Euro 3 сыграли злую шутку и с ГАЗом. В 2005–2006 годах, согласуясь с новым кодексом, на «Газель» стали устанавливать водяной насос, оборудованный вискомуфтой с включением вентилятора через электронный блок управления. Принцип работы прост: блок считывает данные с температурного датчика и в зависимости от показаний дает команду электровентилятору. Казалось бы, дешево и сердито. Но не тут-то было. Агрегат появился на свет аж с двумя врожденными заболеваниями!

Вискомуфта, «повисшая» на приводном валу помпы, естественно, добавила нагрузки. Дабы сохранить ресурс насоса, конструкторы усилили подшипник, но просчитались. Масса вискомуфты значительно превышает возможности подшипника. Как результат после порядка 10 тыс. км пробега помпу приходится выкидывать. Впрочем, это лишь полбеды. Главная трагедия заключается в том, что вискомуфта включает вентилятор только после +100 градусов. То есть тогда, когда двигатель уже преодолел верхний критический барьер рабочей температуры. Достаточно мало-мальского засорения системы (как правило, в той или иной степени система охлаждения засорена на любой машине), чтобы в двигателе начался процесс парообразования. Последствия же более чем плачевны. Как минимум придется заменить прокладку головки блока цилиндров, а саму голову фрезеровать…

Как быть?

Итак, положение удручающее, однако не фатальное. Сегодня на рынке сравнительно недорого (см. таблицу) можно приобрести как двухрядные, так и трехрядные радиаторы. Последние, впрочем, уже перебор: практика показала, что двух рядов для исправной работы системы более чем достаточно. С помпой ситуация выглядит посложнее. Дело в том, что насос с вискомуфтой не взаимозаменяем с насосом предыдущего поколения. Чтобы приладить на «Газель» современного образца «старую» помпу, придется менять и корпус термостата. К сожалению, конструкция такова, что размеры патрубков не совпадают. Тем не менее мы рекомендуем не ждать, пока беда постучится сама, а заблаговременно установить насос системы охлаждения с принудительным приводом вентилятора. Затраты несоизмеримо меньше по сравнению с ремонтом ГБЦ.

Помимо прочего, советуем почаще обращать внимание на крепление радиатора. Конструкция весьма хлипкая. Колебания радиатора очень часто достигают такой амплитуды, что он упирается в вентилятор. Итог — замена радиатора. Сразу после покупки машины не забудьте протянуть хомуты патрубков. Как правило, они едва-едва наживлены. Ну и наконец, будьте аккуратны с краном отопителя. Поведение его непредсказуемо, при этом сам кран неремонтопригоден, а извлечь сию деталь на свет божий крайне затруднительно.

Замена подшипника вискомуфты газель бизнес

Продемонстрируем для вас хитрый способ снятия и замены электромуфты включения вентиляторов без снятия радиатора в Газель Бизнес с двигателем 4216. Сразу стоит предупредить, что если у вас машина была битая и плохо вытянута, таким образом поменять электромуфту у вас не получится. Снимаем верхнею часть телевизора, снимаем ремень, откручиваем диффузор. Вытаскиваем штекер идущий на электромуфту. Откручиваем саму электро муфту (3 гайки под ключ на 13) подобраться к ним не сложно. Диффузор отодвигаем в сторону и достаём электро муфту вместо с вентилятором наверх. Вытаскиваем муфту между генератором и помпой. Снимаем вентилятор со старой муфты и ставим на новую. Собираем всё в обратной последовательности.

Видео замены электро муфты включения вентиляторов без снятия радиатора в Газель Бизнес:

Резерв видео по замене электромуфты включения вентиляторов в Газель 4216:

Такой способ замены занимаем гораздо меньше времени, чем если бы вы снимали радиатор, но есть свои трудности.

1.Привод вентилятора ГАЗель ДВС-4216 Е-3 под ремень 13х875, 13х900 вместо электромуфты (для установки вентилятора постоянного вращения) цена 1675 руб
2.Привод вентилятора ГАЗель ДВС-4216 Е-4 под ремень 6PK 1370 вместо электромуфты (для установки вентилятора постоянного вращения) цена 1580 руб
3.Привод вентилятора ГАЗель ДВС-4216 Е-4 под ремень 6PK1370 вместо электромуфты (для установки эл. вентилятора) цена 1220 руб

Comments 10

Постоянное вращение вентилятора на расход влияет негативно, к сожалению…

нашел решение!на новых некстах с эвотечем(тот же 4216) стоит вискомуфта! как на дизелях и 409 движках.но в продаже нет нигде…пока что.кто найдет отпишитесь

на е3 300т пропердолил и только 2 раза муфту сменил, перегревом проблем не каких

Не знаю почему все жалуются на перегрев, у меня 4216 Е3 вообще нет проблем. В прошлом году поменял электромуфту по причине развалившегося подшипника и всё. Машина 2010 года

Уважение за проделанный труд но я включил его раньше а потом и вовсе прихватил заводскую в трех местах сваркой и постоянно вращается. Соглашусь с парнями на счет шума и расхода и незначительной потери мощности но и охлаждение лишним не будет. В общем каждому свой выбор кто к чему стремится

Делаю всегда проще и без затрат и никогда перегрева не бывает, за исключением если с памятью у вас проблемы, уже на которой машине с умз с новья вывожу принудительную кнопку включения эл.муфты на панель, летом в городе всегда включена и в пробках и везде по городу не греется, по трассе включать нужно только в начале подъёма и то если идёшь гружённый, на предыдущей машине пробег 420 тыс км правда на двух двигателях, 220 и 200 соответственно, ни разу не вскрывали гбц у обоих движков, ни разу, выводы делать вам .

Альтернативы пока нет (мы над этим работаем) а пока предлагаем удалить симметрично 4 лопасти (до 7) и тогда комфортно ездить.

нашел решение!на новых некстах с эвотечем(тот же 4216) стоит вискомуфта! как на дизелях и 409 движках.но в продаже нет нигде…пока что.кто найдет отпишитесь

А вентилятор только родной оставлять или есть пластик. На е4 другое вращение?

вращение левое, тоже заварил так как у меня полноприводный, раньше масло со всех щелей и тосол лезли из зи большого диапазона перепада температур и морально ус таревшего двигателя с историей в 60 лет…теперь на постоянном вращении температура всегда 80 и жидкости на месте

В один прекрасный день присматривался к ремню генератора, тот уже давно просился на помойку с пробегом за 130 000 км и случайно покрутил крыльчатку вентилятора. К моему удивлению обнаружил на Газели люфт вискомуфты. Поломка подшипника вискомуфты не распространенная на Газель Некст с двигателем Cummins 2.8 , поэтому как там все устроено я не знал. В ночь нужно было ехать в рейс и я решил оставить как есть до следующего дня.

На другой день полез под капот. Необходимо освободить пространство для маневра вокруг вискомуфты вентилятора, для этого откручиваем кронштейн ГУРа с бачком и убираем в сторону.

Откручиваем 4 гайки на 10, которые держат диффузор и поднимаем вверх.

Вискомуфта каминс прикручена к шкиву опоры вентилятора гайкой на 32.
Записал ролик «Замена вискомуфты Cummins» посмотрев его можно за 30 минут произвести замену без труда.

Гайку можно открутить довольно быстро ударом длинного зубила или монтажки по левой стороне против часовой стрелки. После этого можно крутить ключом. Я потерял много времяни пытаясь открутить по другому.
На ролике отлично видно как это сделать.

Пару оборотов ключом и можно скручивать от руки.

Рассчитывал если честно, что можно будет просто заменить подшипник, т.к. на некоторых автомобилях я его успешно менял. Сделал срез болгаркой, чтобы посмотреть как расположен подшипник в теле вискомуфты. К сожалению ремонту не подлежит, завальцован.

Небольшой тест как работает термодатчик, нагреваем феном пружину и видим как он проварачивает пластину

После того как датчик проворачивает пластину и открывает масленные каналы, масло под действием центробежных сил перетекает из одной камеры в другую и крыльчатка начинает вращаться сильнее. Соответственно если нет нужного количества масла, то вентилятор будет вращаться недостаточно для охлаждения мотора. Если у вас проблемы с перегревом, это может быть одной из причин.

После всех экспериментов куплена новая вискомуфта для Газели Next такая же как и стояла BorgWarner номерок 020005181 стоимостю 3900 р. Не дешевое удовольствие.

Ставим на место и проверяем режимы ее работы. На холодном моторе и хорошо прогретом максимальные обороты, когда чуть прогреется должна крутиться не очень сильно, чтобы не отбирать мощность у мотора, можно в этом режиме остановить свернутой газеткой.

Надеюсь статья была для тебя полезной и интересной )

Вентилятор охлаждения + Вискомуфта Cummins ISF2.8 020005181 Газель-Бизнес/Next в Санкт-Петербурге (Автомобильные диффузоры)


Вискомуфта в сборе с вентилятором охлаждения устанавливается на автомобили Газель «Бизнес» и Газель «Next», комплектуемых двигателем Cummins (Камминз) ISF 2.8.

Общий принцип работы вискомуфты вентилятора.

При работе двигатель внутреннего сгорания автомобиля нагревается до высоких температур. На поддержание нормальной рабочей температуры двигателя (в пределах 80-90 градусов), а также на обеспечение более быстрого прогрева двигателя, направлена работа системы охлаждения. Именно система охлаждения позволяет двигателю работать на максимальной мощности и продлевает срок его службы, а потому для любого современного грузового или легкового автомобиля ее исправность – залог бесперебойной работы двигателя в любых, в особенности сложных, дорожных условиях.

Конструкция системы охлаждения.

Для того, чтобы система охлаждения работала исправно, необходима исправная работа всех ее элементов. К элементам системы охлаждения относятся рубашки охлаждения блока и головки блока цилиндров, центробежный насос, термостат, вентилятор, радиатор с расширительным бачком, соединительные патрубки и шланги. Один из самых важных элементов системы охлаждения – вентилятор, который увеличивает скорость проходящего через радиатор воздух. С точки зрения конструкции вентиляторы, устанавливаемые на современных автомобилях, могут быть четырех- и шестилопастными. Вентилятор может работать постоянно. Электровентилятор включается для охлаждения двигателя только тогда, когда температура достигает ста градусов. Скорость вращения вентилятора снижается при низкой температуре, с увеличением температуры будет увеличивается и скорость работы вентилятора. Вентилятором обеспечивается воздушное охлаждение деталей двигателя, которое обеспечивает более быстрый прогрев двигателя.

Работа вискомуфт вентилятора.

Вискомуфты вентилятора напрямую влияют на изменение работы вентилятора, режим которой может быть разной и зависит от степени нагрева двигателя и температуры окружающей среды. Принцип работы вискомуфт вентилятора прост: при прогреве двигателя возрастает давление жидкости и вискомуфта передает крутящий момент от двигателя к вентилятору. С увеличением давление увеличиваются и обороты вентилятора, и таким образом регулируется его работа. На то, что неисправности в работе вентилятора могут быть связаны с неисправностью вискомуфт вентилятора, может указывать перегрев двигателя, когда скорость потока воздуха снижается. В этом случае необходимо провести диагностику системы охлаждения и заменить вискомуфты. Возможно также осуществить блокировку вискомуфт вентилятора, однако это может использоваться только в качестве временной меры по устранению неисправностей. Свою работоспособность такая муфта может сохранять в некоторых моделях автомобиля лишь до 300 километров пробега.

Проверка исправности вискомуфт вентилятора.

Для того, чтобы проверить, исправны ли вискомуфты вентилятора, необходимо проверить уровень масла. При минимальной и максимальной температуре двигателя и при отсутствии вращения вентилятора масло будет находиться на рабочей поверхности вискомуфт вентилятора и обеспечивать максимальное трение между этими поверхностями. При этом для того, чтобы повернуть крыльчатку вентилятора, необходимо приложить значительное усилие. Для того, что проверить исправность вискомуфт вентилятора, можно использовать бумажную трубку. С ее помощью можно предпринять попытку остановить работающую крыльчатку вентилятора. При высокой степени нагрева двигателя сделать это будет невозможно, что свидетельствует об исправной работе вискомуфт вентилятора.

Вискомуфта вентилятора газель камминз | Хитрости Жизни

В один прекрасный день присматривался к ремню генератора, тот уже давно просился на помойку с пробегом за 130 000 км и случайно покрутил крыльчатку вентилятора. К моему удивлению обнаружил на Газели люфт вискомуфты. Поломка подшипника вискомуфты не распространенная на Газель Некст с двигателем Cummins 2.8 , поэтому как там все устроено я не знал. В ночь нужно было ехать в рейс и я решил оставить как есть до следующего дня.

На другой день полез под капот. Необходимо освободить пространство для маневра вокруг вискомуфты вентилятора, для этого откручиваем кронштейн ГУРа с бачком и убираем в сторону.

Откручиваем 4 гайки на 10, которые держат диффузор и поднимаем вверх.

Вискомуфта каминс прикручена к шкиву опоры вентилятора гайкой на 32.
Записал ролик «Замена вискомуфты Cummins» посмотрев его можно за 30 минут произвести замену без труда.

Гайку можно открутить довольно быстро ударом длинного зубила или монтажки по левой стороне против часовой стрелки. После этого можно крутить ключом. Я потерял много времяни пытаясь открутить по другому.
На ролике отлично видно как это сделать.

Пару оборотов ключом и можно скручивать от руки.

Рассчитывал если честно, что можно будет просто заменить подшипник, т.к. на некоторых автомобилях я его успешно менял. Сделал срез болгаркой, чтобы посмотреть как расположен подшипник в теле вискомуфты. К сожалению ремонту не подлежит, завальцован.

Небольшой тест как работает термодатчик, нагреваем феном пружину и видим как он проварачивает пластину

После того как датчик проворачивает пластину и открывает масленные каналы, масло под действием центробежных сил перетекает из одной камеры в другую и крыльчатка начинает вращаться сильнее. Соответственно если нет нужного количества масла, то вентилятор будет вращаться недостаточно для охлаждения мотора. Если у вас проблемы с перегревом, это может быть одной из причин.

После всех экспериментов куплена новая вискомуфта для Газели Next такая же как и стояла BorgWarner номерок 020005181 стоимостю 3900 р. Не дешевое удовольствие.

Ставим на место и проверяем режимы ее работы. На холодном моторе и хорошо прогретом максимальные обороты, когда чуть прогреется должна крутиться не очень сильно, чтобы не отбирать мощность у мотора, можно в этом режиме остановить свернутой газеткой.

Надеюсь статья была для тебя полезной и интересной )

При оформлении заказа, выберите склад с оптимальной ценой товара и времени его комплектации.

Отправим ваш товар надежными транспортными компаниями!

Вискомуфта вентилятора охлаждения двигателя Cummins ISF 2.8L (Газель Бизнес, Газель Соболь, ГАЗ-3302, ГАЗель Нэкст, Gazelle Next).

Другие наименования детали:

  • Муфта вязкостная без лопастей;
  • Гидромуфта вентилятора;
  • Жидкостно-фрикционная муфта вентилятора.

Деталь отмечена на схеме порядковым номером № 2.

Установлена на опоре вентилятора и прикреплена к ней резьбовой втулкой. Муфта позволяет изменять частоту вращения вентилятора в зависимости от температуры потока воздуха, проходящего через радиатор системы охлаждения. При низкой температуре частота вращения минимальна, по мере повышения температуры частота вращения муфты повышается. Ротор муфты не связан жестко с корпусом, на котором установлен вентилятор, а момент передается за счет внутреннего трения рабочей жидкости. Частота вращения изменяется за счет перетекания объемов жидкости по внутренним полостям муфты и регулируется перемещением пластинчатого клапана.

  • В наличии
  • Оптом и в розницу
  • Код: 020005181

Показать оптовые цены

  • Условия оплаты и доставки
  • График работы
  • Адрес и контакты

Вискомуфта диаметр 410 мм для ГАЗель NEXT, Бизнес, CityLine с двигателем Cummins ISF2.8

Артикул 1: 020005181;

Артикул 2: 33021308060;

Продажа и доставка вискомуфт и вентиляторов в сборе на ГАЗель с доставкой на территории всей России!

Склад: Срок
комплектации:
Наличие: Цена: Количество:
Склад РТ: [SD] 2-4 дня 35 шт. 2 950р.

Вискомуфта для газель | Festima.Ru

Кожух вентилятора Man TGL D0834. В наличии. Диффузор, кожух радиатора, кожух вискомуфты для Man TGL TGM 8,150. 🔨Возможна установка у нас на СТО. 🕑На проверку и установку 14 дней с момента получения! Номер детали: 81.06620.0183, 81.06620-0183, 81066200183. Подойдет на следующие модели: MAN TGL 7.150, MAN TGL7.150, MAN TGL 7150, Man 7, Ман 7, Man7, Man TGL 7, Ман ТГЛ 7.150, MAN TGL 7.160, MAN TGL7.160, MAN TGL 7160, Ман ТГЛ 7.160, MAN TGL 7.180, MAN TGL7.180, MAN TGL 7180, Ман ТГЛ 7.180, MAN TGL 7.190, MAN TGL7.190, MAN TGL 7190, Ман ТГЛ 7.190, MAN TGL 8.150, MAN TGL8.150, MAN TGL 8150, Ман ТГЛ 8.150, Man 8, Ман 8, Man8, Man TGL 8, MAN TGL 8.160, MAN TGL8.160, MAN TGL 8160, Ман ТГЛ 8.160, MAN TGL 8.180, MAN TGL8.180, MAN TGL 8180, Ман ТГЛ 8.180, MAN TGL 8.190, MAN TGL8.190, MAN TGL 8190, Ман ТГЛ 8.190, MAN TGL 8.210, MAN TGL8.210, MAN TGL 8210, Ман ТГЛ 8.210, MAN TGL 8.220, MAN TGL8.220, MAN TGL 8220, Ман ТГЛ 8.220MAN, TGL 8.240, MAN TGL8.240, MAN TGL 8240, Ман ТГЛ 8.240, MAN TGL 8.250, MAN TGL8.250, MAN TGL 8250, Ман ТГЛ 8.250, MAN TGL 10.180, MAN TGL10.180, MAN TGL 10180, Ман ТГЛ 10.180, MAN TGL 10.190, MAN TGL10.190, MAN TGL 10190, Ман ТГЛ 10.190, MAN TGL 10.210, MAN TGL10.210, MAN TGL 10210, Ман ТГЛ 10.210, MAN TGL 10.220, MAN TGL10.220, MAN TGL 10220, Ман ТГЛ 10.220, MAN TGL 10.240, MAN TGL10.240, MAN TGL 10240, Ман ТГЛ 10.240, MAN TGL 10.250, MAN TGL10.250, MAN TGL 10250, Ман ТГЛ 10.250, Man 10, Man10, Man TGL 10, Ман 10, MAN TGL 12.180, MAN TGL12.180, MAN TGL 12180, Ман ТГЛ 12.180, MAN TGL 12.190, MAN TGL12.190, MAN TGL 12190, Ман ТГЛ 12.190, MAN TGL 12.210, MAN TGL12.210, MAN TGL 12210, Ман ТГЛ 12.210, MAN TGL 12.220, MAN TGL12.220, MAN TGL 12220, Ман ТГЛ 12.220б MAN TGL 12.240, MAN TGL12.240, MAN TGL 12240, Ман ТГЛ 12.240, MAN TGL 12.250, MAN TGL12.250, MAN TGL 12250, Ман ТГЛ 12.250, Man TGL 12, Man 12, Man12, Ман ТГЛ 12, Ман 12, Man TGM, Ман ТГМ. Есть другие бу запчасти на эти модели. Артикул — 113414. ★★★★★ ★★★★★ ★★★★★ ★★★★★ ★★★★★ ★★★★★ ✔ Быстрая Доставка по всей России и СНГ. До терминала транспортной компании доставка бесплатная. ✔ Производим выкуп грузовых автомобилей, аварийных, неисправных. ✔ Наша специализация разборка грузовых автомобилей Mercedes, у нас есть как б/у так и новые запчасти в наличии. Если чего-то нет в наличии, привезем под заказ с Европы с разбора. Звоните, всегда рады помочь.

Автозапчасти

Вискомуфта привода вентилятора в сборе; с крыльчаткой ГАЗель NEXT GAZ A21R23.1308020 (02123-00-1308020-000)

Настоящим письмом информируем Вас, что в соответствии с Федеральным законом от 03.08.2018 №303-ФЗ «О внесении изменений в отдельные законодательные акты Российской Федерации о налогах и сборах» внесены изменения в часть вторую Налогового кодекса Российской Федерации, в том числе в части увеличения с 1 января 2019 года ставки НДС, предусмотренной п. 3 ст. 164 НК РФ, с 18% до 20%.
В связи с чем, предлагаются следующие условия сотрудничества:

  • Возврат ранее отгруженных товаров с проведением в 2018 г. по ставке НДС – 18% возможен до 29.12.2018г. Все остальные возвраты товаров будут обрабатываться с 09.01.2019 года;
  • Возврат товара, отгруженного в 2019г., производится по ставке НДС – 20%;
  • В платежных поручениях в счет оплаты отгруженного товара в 2018г, в обязательном порядке необходимо указывать ставку НДС-18%;
  • В платежных поручениях в счет оплаты отгруженного товара в 2019 г, в обязательном порядке необходимо указывать ставку НДС-20%.

Надеемся на понимание и дальнейшее взаимовыгодное сотрудничество.

Для формирования заказа Вы можете воспользоваться нашими интернет-площадками или связаться с Вашим ответственным менеджером.

Снятие и установка вискомуфты вентилятора Газель Некс

Вискомуфта устанавливается на опору и крепится к ней с помощью резьбовой втулки.

Для выполнения задания вам понадобятся ключи на 9, 13, 32 и отвертка.

Сливаем охлаждающую жидкость из системы охлаждения (статья — Замена охлаждающей жидкости ГАЗель Next).

Снимаем радиатор системы охлаждения (статья — Снятие и установка блоков системы охлаждения Газель Next).

Снимаем интеркулер.

Откручиваем резьбовую втулку крепления муфты ключом на 32 против часовой стрелки и снимаем в сборе с вентилятором.

Для откручивания резьбовой втулки на ее внешней поверхности выполнен ключ шестигранный на 32.

Открутить четыре винта крепления крыльчатки вентилятора к муфте

Отсоединить крыльчатку от муфты

Установите вискомуфту в обратном порядке.

Для снятия опоры вентилятора снимите гидрофрикционную муфту, ремень привода вспомогательных агрегатов (статья — Замена ремня привода вспомогательных агрегатов Cummins ISF2.8).

Отвернуть шесть болтов крепления ведущего шкива к подшипнику ступицы оси

Снимите шкив с оси

Отвернуть четыре болта крепления опоры к блоку цилиндров

Снять опору

Для замены опорного подшипника отверните болт крепления оси вентилятора.

Выпрессовываем ось 5 привода из подшипника 4. Снимаем стопорное кольцо 1.

Выпрессовываем подшипник из корпуса опоры 8.

Запрессовываем новый подшипник в корпус.

Установите стопорное кольцо.

Запрессовываем ведущую ось в подшипник.

При запрессовке ставить упор под внутреннее кольцо подшипника, иначе можно повредить подшипник.

Установите все детали в обратном порядке.

Пс. Сцепление конечно можно снять не снимая бампера, радиатор и все остальное, но в этом случае можно повредить радиатор и другие детали, ну и конечно будут сложности с подходами при демонтаже и установке сцепления.

отзывы, фото, обзор, технические характеристики, достоинства и недостатки автомобиля

Рынок грузоперевозок стремительно развивается. Ввиду этого значительно увеличивается количество коммерческого транспорта.Если говорить о российском рынке, то самым популярным малотоннажником по праву можно считать «ГАЗель». Эта машина производится с середины 90-х годов. На данный момент Горьковский автомобильный завод выпускает новую серию грузовиков. Это «ГАЗель Next», что в переводе с английского буквально означает следующее. Машина выпускается серийно с 2013 года. Что такое Газель Некст? Обзор, технические характеристики и многое другое — далее в этой статье.

Кабина

Знакомство начинаем с кабины.Она претерпела множество изменений. В первую очередь стоит отметить тот факт, что кабина Некста стала шире, чем у старой ГАЗели. Это большой плюс — теперь внутри гораздо больше места. Изменился и сам дизайн. Автомобиль получил крупную V-образную решетку радиатора и ромбовидные фары. Боковые двери также изменились. В машине используются пластиковые крылья. Зеркала тоже изменились. Они стали крупнее и информативнее.


Но есть в этой кабине и недостатки.Так, в отзывах критикуют решетку радиатора. В нем нет мелких ячеек и все насекомые попадают прямо в радиатор. Он забивается и система плохо охлаждает мотор.



О ржавчине

Как известно, прошлое поколение «ГАЗели» имело некачественный металл. Это касается как кузова (но к нему мы еще вернемся), так и кабины. А как обстоят дела с ГАЗель Next? Кабина хорошо защищена от коррозии. Отзывы владельцев говорят о том, что металл долго не ржавеет.Улучшилось и качество покраски. Сейчас эмаль не подходит по годам.

Будка

Модификации, созданные на базе «ГАЗели Next», не учитываются. Это укороченные, удлиненные версии, бортовые, тентованные, со сдвижной крышей, рефрижераторы, цельнометаллические фургоны и др.


Размеры «ГАЗели Next» могут быть разными. Если брать стандартную версию с трехметровым кузовом, то габариты машины следующие. Длина 5,63 метра, ширина — 2.09, высота — 2,14 метра. Дорожный просвет составляет 17 сантиметров. Минимальный радиус поворота составляет 5,6 метра. Габариты Газели Некст при длинной базе могут достигать восьми и более метров. Так, на шасси устанавливаются грузовые платформы длиной 4, 5,5 и 6 метров. Это может быть цельнометаллическая ГАЗель Next или с тентом.

Огромным плюсом является использование алюминиевых досок, которые не гниют. Все газели знают, как быстро ржавеют борта на старых ГАЗелях. Теперь коррозия не враг.


Но, к сожалению, так было не с каждым грузовиком.Так вот, эти машины часто переделываются на сторонних фирмах (например, «Луидор»). Эта компания занимается изготовлением различных типов кузовов и их установкой. Однако, как отмечают отзывы, такие кабинки сильно подвержены коррозии. Это касается как тентованных версий, так и цельнометаллических Газелей Next. Через полгода краска начинает шелушиться, под ней появляется коррозия. Ржавеет не только рама, но и ворота. Однако к функционированию будки претензий нет.Свою работу она выполнит «на все сто», но внешний вид быстро испортится – говорят отзывы.

Салон

Изменился и дизайн салона. В первую очередь стоит отметить переднюю панель. Он кардинально отличается от предыдущего. Так, на центральной консоли реализованы круглые дефлекторы воздуха с возможностью регулировки в разные стороны, новый блок управления печкой и мультимедийной системой. Правда, последний есть не во всех комплектациях «ГАЗели Next».

Панель приборов также изменилась. Одометр цифровой. Также есть бортовой компьютер. «Пончик» изменился. Вместо архаичного двухспицевого руля (который стоит еще во времена Газона 3307) удобный четырехспицевый руль. В салоне есть различные ниши для вещей и мелочей.


Сиденья тоже изменились. Так, водитель получил подлокотник и имеет хорошую боковую поддержку. Кресло стало жестче, что вызывает меньшую усталость при дальних перевозках.ГАЗель Next имеет хороший обзор внутри (за счет «капитанской» посадки). Пассажирское сиденье — двухместное, рассчитано на двух человек.

Обратите внимание, что на моделях 2017 года рычаг переключения передач перенесен на переднюю панель. Такое решение позволило более рационально использовать внутреннее пространство. Теперь при необходимости на сиденьях можно удобно поспать, — говорят отзывы. Звукоизоляция также улучшилась. Были штатные динамики и электростеклоподъемники.

В целом грузовой отсек ГАЗели Next стал комфортнее, эргономичнее и современнее.По сравнению со старой кабиной это значительный прогресс.

Этот автомобиль оснащен одним из двух двигателей. «ГАЗель Next» оснащена китайским двигателем Cummins и российским УМЗ. Первый агрегат развивает мощность 149 лошадиных сил при рабочем объеме 2,8 литра. Второй имеет объем 2,7 литра. Двигатель ульяновской ГАЗели Next развивает мощность 107 лошадиных сил. Этот агрегат называется «Эвотек». Что говорят отзывы об этих моторах ГАЗель Next? Ниже мы рассмотрим особенности каждого двигателя отдельно.

Cummins и его преимущества

Итак, сначала рассмотрим дизельную «Газель Next». Среди плюсов отзывы отмечают межсервисный интервал, который составляет 20 тысяч километров. Что касается расхода топлива, то на этот параметр влияет несколько факторов. Это парусная будка и вес перевозимого груза. Но какой бы высокой ни была будка, в городе с пробками дизельная ГАЗель Next тратит не более 15 литров на сотню. По трассе этот параметр составляет от 12 до 14 литров.

По отзывам, ГАЗель Next имеет самый низкий расход при скорости 75-80 километров в час. Радует то, что двигатель без проблем заводится в морозы.

Недостатки китайского двигателя в «Газели Next»

Отзывы говорят о том, что на заводе плохо продумали расположение интеркулера. Он должен располагаться на большом расстоянии от радиатора охлаждения двигателя, чтобы мог циркулировать воздух и внутри не скапливалась грязь. Но эти два элемента практически плотно прижаты друг к другу.Из-за этого интеркулер часто забивается пылью и ворсинками. В результате он не охлаждает воздух, который турбина нагнетает во впускной коллектор. Радиатор двигателя тоже забит.


Также владельцы сталкиваются с такой проблемой, как появление антифриза в цилиндрах. Эта проблема характерна для двигателей Евро-4. Но это обычно результат дикого перегрева. Чтобы этого не произошло, нужно регулярно следить за радиатором, о котором мы говорили ранее.

Двигатели Евро 4 имеют другую проблему. Это наличие системы рециркуляции отработавших газов. Клапан EGR перепускает часть газов в цилиндр, благодаря чему несгоревшее топливо полностью сгорает в двигателе. Но как оказалось, система не очень надежная. Кроме того, ЕГР сильно «душит» мотор и он становится менее отзывчивым (это можно ощутить, пересев на ГАЗель Евро-3 с тем же двигателем).

Радиатор также соединен с клапаном рециркуляции газов для охлаждения выхлопа.Со временем начинает течь. Из-за ненадежности системы владельцам приходится «глушить» эту систему, устанавливая металлические заглушки между выпускным коллектором и клапаном. Вместе с этим производится прошивка электронного блока управления. Таким образом, цилиндры не закоксовываются, а сам мотор становится более приемистым.

О компании «Эвотек»

Данный агрегат выпускается на Ульяновском моторном заводе с 2014 года. Построен на базе УМЗ-421, который также ставился на старую Волгу.Однако производитель утверждает, что двигатель претерпел существенные изменения. Так, в конструкции были использованы более легкие и прочные материалы, а стыки получили качественные уплотнители. Усовершенствованная система охлаждения и смазки. Поменял водяную рубашку головки и блока цилиндров. Двигатель не склонен к перегреву.


Среди действительно полезных улучшений владельцы отмечают качество уплотнителей. Как известно, старый ульяновский мотор «сопливил» буквально с завода.Теперь масло не уходит наружу, а двигатель больше не «потеет». Также снижен расход масла. Причиной стал зазор между втулкой клапана и штоком. Была изменена система вентиляции картера, что также положительно сказалось на снижении расхода масла. Что касается ресурса, то этот агрегат ходит около 400 тысяч километров. Межсервисный интервал составляет 15 тысяч километров. Однако отзывы рекомендуют менять масло чаще – каждые 10 тысяч километров.

Что еще изменилось в Эвотек?

Конструкция этого мотора была основательно изменена.Итак, среди основных преимуществ стоит выделить использование гидрокомпенсаторов зазоров клапанов. Таким образом, двигатель больше не нуждается в регулировке клапанов. Для снижения сил трения (и, как следствие, повышения КПД) на поршни был нанесен полимерный слой дисульфида молибдена. Блок цилиндров изготовлен из алюминия, а клапанная крышка с впускным коллектором – из пластика. Также стоит отметить полимерный поддон. Все это позволило значительно снизить вес двигателя.

Работа газораспределительного механизма на моторе Ульяновск осуществляется за счет зацепления распределительной шестерни с коленчатым валом.Таким образом, в приводе отсутствуют цепи и ремни, которые могут растянуться и порваться.

Впрыск топлива осуществляется через электронные форсунки марки «Delphi». Поршневую группу поставляет южнокорейская компания LG. А датчики для электронного управления производит Bosch. Гидрокомпенсаторы разработаны американской корпорацией «Итон».

Еще один плюс — возможность продлить ресурс двигателя за счет капитального ремонта. Поршневая группа имеет целых три ремонтных размера.

О расходе двигателя Эвотек

По сравнению со старым ульяновским двигателем Эвотек стал экономичнее. Но все равно расход у него выше, чем у китайского Cummins. Итак, на сотню авто расходует около 16-18 литров топлива. Ввиду этого многие владельцы устанавливают газовое оборудование. По отзывам, ГАЗель Next тратит на газ всего на 1-2 литра больше, чем на бензин. А стоимость топлива почти вдвое меньше.

Что касается технических характеристик, то ГАЗель Next по-прежнему приемистая и резвая.Разницы в езде на газе и газе нет. Кстати, установка газового оборудования возможна прямо на заводе (разумеется, за отдельную плату).

Шасси

Также была изменена конструкция подвески. Многие знают, что на старых ГАЗелях спереди используется шкворневая балка с рессорами. Теперь ее заменила независимая подвеска с винтовыми пружинами, шаровыми опорами и рычагами. Сзади располагался классический мост с пружинами и стабилизатором поперечной устойчивости. Главная передача — гипоидного типа с коническим дифференциалом.Амортизаторы — гидравлические, двухстороннего действия.


Изменена и система рулевого управления. Так, вместо редуктора используется более современная рейка. Автомобиль оснащается гидроусилителем в любой комплектации.

Тормозная система в целом не изменилась, но есть небольшие доработки. Так вот, он по-прежнему гидравлического типа, двухконтурный с вакуумным усилителем и тросовым стояночным тормозом. Спереди реализованы дисковые тормоза, а сзади барабанные. Изменения коснулись размеров тормозных колодок.За счет увеличения рабочей площади автомобиль стал более отзывчивым на педаль тормоза.

Как ведет себя машина на ходу?

В первую очередь стоит отметить тяговитость автомобиля. С дизелем машина без проблем преодолевает подъемы и даже разгоняется на них. Момента хватает для уверенного обгона. С бензиновым двигателем машина хуже отзывается на педаль, но ведет себя гораздо лучше, чем с двигателем ЗМЗ, который раньше ставился на ГАЗель.

Теперь о поездке. Как ни странно, но архаичная пружинная балка была мягче. Но у пружинной независимой подвески есть один существенный плюс. С ней машина не кренится в поворотах. Передний путь будет немного жестче, но в повороты машина входит гораздо легче и легче. Также машина уверенно держит прямой курс за счет стойки и хорошо отзывается на повороты руля.

Задняя подвеска не изменилась, а потому ее характеристики остались прежними. Но стоит сказать, что машина не проседает при полной загрузке.Дополнительные пружины здесь редко устанавливаются, как это было на старых Газелях. Но это касается короткобазных моделей. На пяти- и шестиметровых версиях пружины уже начинают проседать при полной нагрузке.

Кстати, в последнее время большой популярностью стали пользоваться вспомогательные пневмоподвески. Особенно это касается длиннобазных моделей, которые без нагрузки весят 3 тонны.

В плане обслуживания подвеска стала более прихотливой, так как есть дополнительный передний стабилизатор и шаровые опоры.Они не любят ямы и вообще большие нагрузки. Поэтому их ресурс всего 50 тысяч километров. С другой стороны, запчасти на ГАЗель Next дешевле, чем на иномарки. А найти нужное можно в любой точке города.

Подведем итоги

Итак, мы выяснили, какими особенностями и техническими характеристиками обладает Газель Некст. Автомобиль порадовал многих. Это действительно прогресс. Наконец-то на ГАЗе был создан надежный и конкурентоспособный малотоннажный грузовик. Однако его не стоит сравнивать с современными «Спринтерами» и прочими иномарками.Хотя в конструкции много зарубежных решений, но у машины все же есть разные «косяки». Однако их количество намного меньше, если взять для сравнения ту же «ГАЗель Бизнес». Что ж, подведем итоги. Среди достоинств автомобиля стоит отметить:

  • В наличии запчасти на ГАЗель Next. Их стоимость ниже, чем на иномарки.
  • Хорошее обращение.
  • Наличие полезных опций.
  • Просторный и удобный салон.
  • Низкий расход топлива
  • Возможность удлинения базы по индивидуальному заказу.

Из недостатков жесткая передняя подвеска, ржавая будка «Луидор» и небольшие «косяки» по двигателю. В целом, этот автомобиль является хорошей альтернативой немецким легким грузовикам. В первую очередь ГАЗель привлекает своей ценой и меньшей стоимостью обслуживания. Также этот автомобиль имеет высокую ликвидность на рынке.

«Газель» — Кабриолет,  «Волга» — Купе А&Nbsp; Прочее: Самые странные разработки ГАЗ

Возможно, вы слышали об «Атамане», «Комбате» или «Тигре-2» — эти концепты с яркими названиями Горьковский автозавод создал еще в девяностых, пытаясь найти новый стиль или обыграть образы автомобилей из прошлого.Недавно в заброшенном ангаре было найдено несколько концептов. Но мы решили вспомнить еще более замечательные и дикие прототипы ГАЗов девяностых или двухтысячных: экспериментальную двухдверную Волгу, Газель без крыши и что-то под названием CityVan.

СитиФан

Газель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗГазель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗГазель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗ

Перспективный фургон ГАЗ-2332 — одна из таких находок в пыльном ангаре УКЭР ГАЗ.Младший брат грузопассажирского «Соболя» и фактический наследник советского «Каблука» был разработан в 2006 году и впервые показан на Московском автосалоне. Причем прямо в павильоне, а не снаружи, где обычно размещается коммерческая экспозиция. CityVan со стеклопластиковыми панелями был собран на уникальной стальной основе с добавлением серийных агрегатов «Волга» и «Газель». Компания не постеснялась заглянуть в будущее и представила заднеприводную новинку в целой гамме вариаций: от легковых минивэнов до полноценных карет скорой помощи.Но будущее у CityVen так и не наступило, и уникальный красный концепт выставочных наклеек теперь покрылся пылью на одном из складов конструкторских и опытно-конструкторских работ ГАЗа.

ГАЗель Кабриолет

Газель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗГазель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗ

Еще более смелая фантазия, больше напоминающая гаражный проект для «Автоэкзотики», чем серьезный прототип ГАЗ. Она называлась ГАЗель Кабриолет.Прямо и ясно. У девятиместного ГАЗ-2705 2005 года вообще не было крыши, а в задачи автомобиля входили перевозка делегаций и проведение торжеств на открытом воздухе. Оригинальность идеи (отмеченная специальным призом выставки «Автосалон») соседствовала здесь с простотой доработок. В отличие от машин для общественных выходов Папы, кабриолет остался по сути Газелью. Только в «золоте» и без верха.

ГАЗ-31105-121 «Спорт»

Газель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗГазель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗГазель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗ

Если открыть «Газель» завоевал симпатии, полностью лишившись крыши, затем седан ГАЗ-3110 приковал к себе внимание благодаря необычному двухдверному кузову.Причем помимо процедуры закрывания задних дверей концепция прошла еще одну: кузов автомобиля укоротили на 20 сантиметров, что сделало капот визуально еще длиннее. Что касается спорта, то он не закончился кузовными переделками, а продолжился под капотом: 2,3-литровая 150-сильная ЗМЗ-четверка за счет наддува получила прибавку в 40 турболиний и была готова разогнать купе до сто за 10 секунд! Но создатели оказались не готовы к серийному выпуску «Спорта».В итоге ничего, кроме презентации автомобиля по цене 12 000 долларов и диалогов с тюнинговыми компаниями о возможном мелкосерийном производстве, не произошло.

ГАЗ-3102 Карди

Газель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗГазель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗГазель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗ

Любопытно, что рестайлинг легендарной и долговечной модели кажется событием даже сегодня.Какие ежегодники про все более и более «современный» Лад 4×4. А в 2004 году, когда на ГАЗе думали о свежем облике для «Волги» ГАЗ-3102, любую попытку улучшить машину можно было часами обсуждать как очень важную событие. Впрочем, проект московской дизайн-студии Cardi был не «какой-нибудь», а вполне качественной попыткой добавить нижегородскому седану свежести. Лицо в духе британских Rolls-Royce и Bentley тех лет, корма с не менее британскими отсылками к Jaguar и Daimler… Да, эта Волга выглядела интересно.Кроме того, переделки не коснулись центральной части автомобиля: не изменились оконные и дверные проемы, что упростило запуск в производство. Однако серийного будущего такой вариант не дождался: пробыв еще несколько лет на конвейере, устаревший ГАЗ-3102 был снят с производства.

НАМИ-ГАЗ Волга Престиж

Газель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗГазель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗ

Еще более необычная версия рестайлинговой Волги была разработана ранее, в 1995 году.Взаимодействие завода с институтом НАМИ было попыткой привлечь к стареющей «Волге» интерес чиновников, уже присматривавшихся к подержанным иномаркам. В экстерьере, выполненном по канонам биодизайна, читались отсылки к японским и английским автомобилям, а «морда» с четверкой фар и куполообразной решеткой радиатора старалась казаться и европейской, и… православной. Салон концепта изобиловал электроприводами и бежевой кожей, но, увы, продолжал оставаться «волговским».Читать устарело. Странная новинка так и не попала в серию.

Мотохата-96

Газель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗГазель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗ

Стильный вместительный кемпер на базе Газели спроектировали не горьковчане, а Подмосковная компания Мотохата. Причем дебют прототипа пришелся на конец девяностых, когда подобные дома на колесах мелькали только в журнале «Техника – Молодежь».Собственно, отечественная кемпинговая «Газель» была только наполовину: от модели взяли раму, кабину и агрегаты. Жилой модуль собран и оснащен зарубежными комплектующими: от моющейся авиационной пленки на поверхности до голландского унитаза Thetford, холодильника Electrolux и блока климат-контроля. Внутри «Мотохата-96» находились два дивана, стол, кухонный блок, двуспальная кровать в отсеке над кабиной, душ, необходимые баки для воды, аккумулятор на 105 ампер, газовое оборудование для плиты.Сколько это будет стоить? Более 50 000 долларов с «родным» бензиновым двигателем и почти 60 000 долларов — с дизелем Peugeot! Конечно, это отпугивало всех потенциальных покупателей.

ГАЗ-3105

Газель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗГазель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗГазель-кабриолет, Волга-купе и другие: самые странные разработки ГАЗГазель-кабриолет, Волга-купе и другие другие: самые странные разработки ГАЗ

Только представьте, он мог бы стать «Волгой» девяностых! Дизайн, словно взятый у Джуджаро, низкая, раздвоенная линия окон, обтекаемый кузов и отсутствие «подтяжек» в силуэте – все дерзко и современно.Красота?! Но, по ряду веских причин, революционная во всех смыслах «Волга» — от дизайна до конструкции — сначала была упрощена внешне (убраны нижние окна и жирные дверные ручки), а затем, выпущенная небольшой партией, была отправлена ​​в полки истории ГАЗ. Насколько хорошей может быть машина?

Представим: двигатель V8, современная платформа, возможность полного привода типа quattro от Audi, подвеска MacPherson, регулировка руля, электроприводы, климат-контроль и так далее… Насколько конкурентоспособной может быть такая Волга на фоне просачивающихся в страну BMW и Audi, Opel и Mercedes-Benz? И самое главное, насколько стабильным могло быть производство автомобиля в условиях распада СССР? Ответ ясен.

Лучник 4 сезон / Смешно

    открыть/закрыть все папки 

    «Фуга и риффы» 

  • Это большой кроссовер с другим шоу. Арчер страдает амнезией и думает, что управляет бургерной с женой, сыном и двумя дочерьми, и считает, что его зовут Боб. Да, тот самый Боб.

    «Боб» : Боже мой. Хорошо, да, ты можешь потереть их, но только, пожалуйста, не обижай мою семью.

    Агент КГБ 2 : Нет, он имеет в виду, что мы не грабители .

  • Кригер говорит всем, что хрупкое психическое состояние Арчера из-за его амнезии означает, что они должны быть осторожны с повторным представлением его настоящей личности:

    Кригер: У меня есть растение! … Растение! План!

  • План Кригера включает его и Сирила, притворяющихся агентами КГБ, в то время как Лана притворяется, что бежит от них. Она информирует Боба!Арчера о «ситуации»:

    Лана: Первое, что нам нужно сделать, это обыскать весь спа-центр для… агенты, особенно эти двое [показывает фотографии из досье Сирила и Кригера в «маскировке КГБ»]

    Арчер: [хихикает] Простите, вы только что сказали Гей -GB?

    Кригер: [через наушник Ланы] Ой…

  • В сочетании с Забавно, но когда Арчер вызывает Лану на спарринг в гостиничном номере, чтобы продемонстрировать свои навыки рукопашного боя, она подхватывает его… и швыряет в стену, так что сильно он трескает гипсокартон с другой стороны, где находится остальная часть команды. Бонусные баллы в том, что все, что мы видим, это кадр, на котором Мэллори, Рэй, Кригер и Сирил вздрагивают от громкого удара, трескающейся стены и дребезжащих картин от удара.

    «Ветер плачет, Мэри»: 

  • «Лана, я найму Кенни Логгинса, чтобы он пришел сюда и сыграл акустический сет, а я вдублю тебе немного здравого смысла..»
    • Позднее в эпизоде ​​звучит акустический рингтон Арчера «Danger Zone». .

      Кригер: Ой, Пигли II.

    • Пока Мэлори обсуждает проблему с муравьями и то, как Кригер обещал ее решить:

      Мэлори : …Мистер. «Я-могу-решить-вашу-муравьиную-проблему»!

      Кригер : Прежде всего, это Доктор Я-Могу-Решить-Вашу-Проблему-Муравья… [Смена плана: Кригер привязан к устройству, в то время как устройство стреляет лучом излучения в муравья и на Кригера, пока он кричит и маниакально смеется] И, во-вторых, вот ваше возмещение. [Дает Мэлори конверт, полный денег] Я действительно думал, что это сработает.

      Лучник : Что ты собирался делать? Сила муравья относительно размера человека?

      Кригер : … Заткнись.

      • Как сверхсила решит проблему, совершенно неизвестно.
    • Мэллори решила использовать базовую охрану арсенала ИГИЛ:

      Пэм: Это Родни, он новый… как бы там ни было… оружейный библиотекарь.

    • Конец , где после того, как друг Арчера и бывший агент ИГИЛ Лукас Трой признался, что сделал что-то сексуальное с Арчером (что именно не известно, но Арчер потерял сознание на Мама-Хуане и это было связано с музыкой Эла Грина и загаром масло) во время их миссии в Карибском море, он переходит к ошеломленным и встревоженным Арчеру, Лане и Сирилу в машине, едущей в тишине.
    • И когда Арчер видит на земле оранжевую снежную одежду Сирила

      Лучник: Ладно, так что… не знаю, что с этим делать. Если только…( Оглядывается вокруг ) Подожди, нет, нет. Выбрось это из головы. Хищник охотится только в тропических джунглях… я предполагаю… и отчаянно надеюсь.

    • Подобно Арчеру «фразировка», Лукас Трой «сказал твою маму».
    • Арчер выслеживает Лану и Сирила по снегу и натыкается на кучу пустых гильз:

      Арчер: Да, это наша Лана.

      [Оглядывается вокруг]

      Лучник: Посмотрим, судя по выбросу снаряда, она стреляла в… Я очень надеюсь, что это был не энт.

      [Возобновляется поход через лес]

      Лучник: Потому что это последнее, что нам нужно. Entmoot.

      [Подтягивается, задыхаясь]

      Арчер: Боже мой, что, если я гей для Толкина?

        «Ноги» 

    • Рэй и Лана насмехаются над выбором транспорта Арчера.

      Арчер: Эль Камино — это не машина…
      Рэй: Грузовик, что угодно!
      Лучник: …и это не грузовик, это…
      Лана: …транспортный гермафродит?
      Лучник: Заткнись!

    • Когда Кригер предлагает дать Рэю бионические ноги и восстановить его способность ходить, Рэй сначала сопротивляется, но в конце концов соглашается.

      Кригер: Хорошо, скоро должно подействовать обезболивающее.
      Рэй: Какая анестезия- *смотрит на чай, который он пил* БЛЯДЬ, КРИГЕР!!

      • Рэй также немного обеспокоен тем, что Кригер, кажется, не знает настоящих анатомических названий человеческих костей.
    • Бретту снова удается попасть под пулю, только на этот раз он даже не находится на том же этаже , что и Арчер! Пуля Арчера сумела пройти по сложной схеме рикошета и попала в него!
    • Лана и Сирил находят Арчера, бегущего по коридору. Лучник: Я должен остановить его!
      Лана: Остановить кого?
      Лучник: Кому !
      Лана: Арчер !
      Лучник: Кригер! Он делает гей-терминатора!
      Лана: Аааааааааа.Официально запутался.
      Кирилл: Ага. Я имею в виду, он имел в виду Терминатора из геев? Потому что Кригер жуткий и странный, но он не гомофоб, я не думаю, поэтому он, должно быть, имел в виду… ну, нет, разве терминаторы не асексуальны?
    • Рон рассмешил Мэллори, высмеивая Арчера (и немного расизма). Рон Кадиллак: И позвони мне, если когда-нибудь захочешь протестировать новый Coupe De Ville.
      Лучник: Ну, вообще-то, я только что получил новый Эль Камино, так что…
      Рон Кадиллак: О, все готово. Это вместит гораздо больше латиноамериканцев и газонокосилок.
      Мэллори смеется
    • Когда Родни (квартирмейстер) отказывается выпускать Арчера из убежища с ракетной установкой, мы получаем следующее:

      Лучник: Вы действительно хотите пережить восстание машин? ! Которого вы не будете, потому что никто не будет!

        «Полуночный Рон» 

    • Небольшой «опыт связи» Стерлинга с отчимом.

      Рон: Это не совсем «чистые деньги».

      Лучник: [тем же тоном, теми же кавычками] «Ни хрена».

    • Цыганка Шерил была еще раз устрашающе точна в отношении опасности, с которой столкнется Арчер (в данном случае банда байкеров-трансвеститов снимает снафф-порно), и, как обычно, Арчер не устанавливает связь, пока она не становится правдой:
      • Арчер пытается последовать совету цыганки и замедлить байкеров, бросив в них часть денег Рона.Это могло бы сработать, если бы порыв ветра не унес все это не в ту сторону.
      • Арчер особо отмечает, что байкеры, занимающиеся нюхательным порно, установили стол для обслуживания мастеров.
    • Начало эпизода, в котором Арчер застрял в Монреале после того, как проиграл все свои деньги в казино и по-идиотски сжег свой паспорт в пьяном виде. В конце концов, он в отчаянии разбивает таксофон, потому что никто в офисе ему не поможет.

      Прохожий : *с сильным французским акцентом* Зачем ты уничтожил телефон?!

      Арчер : *насмешливо имитируя свой акцент* Потому что мне не с кем звонить!

    • Объяснение Стерлингом эффекта бабочки.

      Лучник : Эффект бабочки, понимаешь? Бабочка в Африке садится на нос Жирафу, Жираф чихает, что пугает Газель, Газель врезается в Носорога, а Носорог вслепую влетает в телефонную будку, каким-то образом звонит в Нью-Йорк и говорит: «Эй, иди, убей этого идиота Рона, за чемодан!», потому что Rhinoceros говорит по-английски !!!

        «Вискомуфта» 

    • Шерил думает, что попала в «Противоположный день».
    • Когда Арчер ловит Лану с Сирилом, он в конце концов догадывается, что хочет отомстить за скотч, что приводит к этому обмену.

      Лана: Ты хоть себя слышишь?

      Лучник: Серьезно, это приходит и уходит.

      Лана: Ну, благодаря тебе я не успела сделать первое, теперь делаем второе.

    • Этот обмен:

      Лучник : Да, это была… третья глупость, которую я когда-либо говорил.

      Катя : Э… подождите… какие были первые два?

      [воспоминание об Арчере в офисе агента по недвижимости]

      Арчер : Приятель, ты только что продал таймшер ! [пожимает руку агенту] Сделайте два таймшера!

      Лучник : Пфф.Проклятые сборы за обслуживание…

    • «Сирил Фиггис снова наносит удар!»
    • Когда Арчер пытается помешать Кригеру помочь Барри покинуть космическую станцию ​​(который хотел увидеть бой роботов).

      Лучник: Кригер! Почему Бэрри улетает с чертовой космической станции?!?»»

      Кригер: Потому что… Первый закон движения Ньютона?

    • Постоянное недовольство Мэлори своими сотрудниками.

      Мэлори: Мне нужно просто закачать нервно-паралитический газ через вентиляцию.

      Кригер: Просто скажи слово.

      • И обратный звонок

        Лана : Вот дерьмо! Здесь действительно есть канистры с нервно-паралитическим газом!

        Мэлори : Я же тебе говорил.

        Лана : Я думала, ты шутишь!

        Мэлори : Что смешного в нервно-паралитическом газе?

        «Once Bitten» 

    • Шутка о парадоксе знаменитостей, когда Арчер говорит, что Крис Парнелл озвучил ангела, который был в роли Бака Генри в их дань уважения Heaven Can Wait.

      Лучник : Спасибо, Бутч третьего класса Генри! Да ладно тебе, ты тут по дороге!

    • Рэй пытается поднять джип, но в процессе ломает себе спину.

      Лучник: Ты меня гонишь? Бионические ноги, и ты поднимаешь его с спиной?!

    • Арчера укусила очень ядовитая змея, когда он какал, и, хотя это достаточно плохо, она укусила его в заражении . Арчер отчаянно умоляет Рэя высосать яд (что, как указывает Сирил, не работает в первую очередь.) Лучник : Да ладно, представь, что я… кто твой любимый парень?

      Рэй : Итак, я полевой рабочий, который в Пондерозе ищет работу, и мои парни порвались-

      Сирил : Если бы мы могли сфокусировать , пожалуйста!

      • Арчер и пальцем не пошевелит, чтобы помочь выкопать джип, когда тот застревает в пустыне, уходит на свалку, требует использовать либо часть взятки, либо карту для туалетной бумаги, признается, что потерял компас в баре в Греции, и, наконец, все равно использует карту… только на этот раз карма кусает его в виде змеи.
    • Арчер галлюцинирует Сирила и Рэя как аллигаторов. Так же безумно, как это звучит.
    • Тоже из того же галлюцинаторного путешествия: (Арчер оглядывается на туркменских племен, наводящих на них автоматы, все еще спотыкаясь о яд кобры)
      Лучник: Эй, посмотрите, Фред и Барни! Мы в лодже Water Buffalo!!
      (Килс над)
    • Многократное использование фразы «гурпгорк» (местный диктатор заставил население изменить название нескольких вещей на имя своей собаки).Как красноречиво выразился Рэй:

      Рэй: Как это одно и то же слово для «хлеба» и «змеи» и «пятницы» и этой проклятой собаки?!

    • Мэлори, Пэм и Шерил высмеивают Лану за то, что она «топает» по офису. Бонусные баллы за впечатление Шерил от AT-AT.

        «Живи и дай поужинать» 

    • Мэлори еще раз звонит с фальшивой угрозой, на этот раз для мест в модном ресторане.
    • Шеф-повара указанного ресторана озвучил ЭНТОНИ БУРДЕН .Каждая строчка из его рта была ревом.
    • Также кляп, в котором Арчер роняет одну из больших мисок для приготовления пищи, затем позволяет ей полностью вращаться, прежде чем что-либо сказать.

      Лучник : Эти миски совершенно скользкие!

    • Кирилл и бараньи головы.

      Лучник: Он в проходной, плачет как ребенок. *переход к Сирилу, который делает именно это.*

      • Ранее, когда Арчер инструктирует Сирила, как разрезать баранью голову на мясо.

      Арчер : Ладно, я хочу сначала язык, потом щёки-

      Сирил : Правда? Тебе не нужны чертовы глазные яблоки?!

      Лучник : *продолжает читать* …о, так язык второй!

    • После того, как посол Албании, по-видимому, задохнулся от еды, этот драгоценный камень можно услышать на заднем плане.
      • После того, как его объявят мертвым.

      Шерил: [своим обычным голосом] Тогда я не хочу того, что у него есть.

    • Промо Bastard Chef . Это точная пародия на «Адская кухня », за исключением того, что в поваров бросают еду, поваров преследуют с тесаком, пьют на кухне, нож вонзается в стену… не очень точно.

        «Coyote Lovely» 

    • Лана обеспокоена возможностью того, что грузовик, перевозящий мексиканцев через границу, может также содержать боевиков Картеля. Арчера это не смущает:
    • После того, как Арчер подслушивает теорию Ланы о том, что он может быть аутистом, он начинает отпускать саркастические замечания по поводу аутичного поведения, когда приходит время сосредоточиться на миссии по дальнейшему траху с Ланой и Сирилом — например, на складывании камней. в порядке убывания размера.В момент «моргните, и вы пропустите» момент после того, как Арчер выстрелил в блок двигателя грузовика, вы можете увидеть, что он на самом деле сделал это. Позже, после того как его застрелили пограничники, он показывает, что пересчитал все пули, и в них закончились патроны.

      Арчер : Боже мой, может быть, я аутист…

    • Когда Арчер разговаривает с пограничниками (которые утверждают, что защищают Америку от террористов), находясь в фургоне, полном нелегальных иммигрантов из Мексики:

      Лучник : Эти люди не… я имею в виду, чтобы не показаться расистом, но мы все знаем, кто такие террористы.

      Лупе : Лос Мусульманес . [Мусульмане]

      Лучник : Лупе, да ладно, ты сейчас в Америке, ты просто намекаешь на это.

    • Иммигранты не могут найти доктора для Арчера, поэтому они приводят его к нелицензированному ветеринару, который постоянно пьет. Когда они впоследствии благодарят его, он говорит им, что, вероятно, причинил больше вреда, чем пользы.
    • Лана пришла в ужас от осознания того, что ее работа в качестве секретного агента состоит в том, чтобы быть няней Арчера.

        «Молодожены» 

    • Пэм ест свой обед, чтобы достать Сирила. Затем она бросает его, поднимает обратно и продолжает делать это. Эта шутка длится около 20 секунд и становится все смешнее из-за этого.
    • Лана и Арчер, висящие на краю небоскреба, обсуждают его испорченные приоритеты.

      Лучник : Лана! Лана! ТЕЛЕФОН!

      Лана : Ты серьёзно залез сюда, чтобы посмотреть, какой у меня бонус?!

      Лучник : ‘Нет, я саркастически залез сюда посмотреть, какой у тебя бонус!’ сказал он, саркастически .Телефон!

    • «Расслабьтесь, это Северная Корея, национальный эквивалент короткого автобуса.»
    • Когда Сирил атакует северокорейского агента с огнетушителем:

      Лана : Я иду, Сирил!

      Лучник : Лана, подожди! Держу пари, это первый раз, когда ты это говоришь!

      • О, и угадайте, у кого тайный продавец оперативники НК собирались купить уран? Кригер!
    • Шерил думает, что в шоколадном муссе есть лось.

      Пэм : Не тот мусс.

        «Un Chien Tangerine»: 

    • Обучение полевого агента Пэм. Основные моменты включают:
      • Прохождение теста в «стерильной» среде. Перевод: Бак голый.

        Пэм: *пукает* Что? Панк-задницы…

      • Выбивание вечно любящих соплей из Сирила, Кригера и Рэя. Тоже лезть голышом.

        Кригер: И так продолжается еще 38 минут раскалывания души.

        Рэй: Из которых вы были там 2.

        Кригер: Три!

      • И Мэлори назвал это «избиением ботаника, нациста и Королевы роботов».
    • Лана (Хождение по пустыне без припасов): А теперь я умру в пустыне. (Вздох) Как и сказала цыганка Шерил!

      (Лана и Шерил в комнате отдыха) Лана: Как я могла умереть в десерте?

      Шерил: О, не знаю, может, гигантский шоколадный мусс?

    • Когда Лана звонит Мэлори, она просит Шерил сказать, что ее нет, что означает, что она не хочет ей отвечать.Шерил, кажется, убеждена, что Мэлори на самом деле нет, несмотря на то, что она объяснила, что она есть. Позже в эпизоде, когда Арчер звонит Мэлори, можно увидеть Шерил сзади, держащую зеркало, чтобы увидеть отражение Мэлори.

      Мэлори : И если ты прикоснешься ко мне, то проведешь обеденный перерыв, примеряя протез руки!

      Шерил : У меня всего 45 минут…

        «Папская погоня»

    • Пэм и Шерил задыхаются, когда ругаются со священниками/кардиналами
    • «Ваш итальянский» ?»
    • «Я не виноват, что Италия такая веселая!»
    • Папа выглядит точно так же, как Вудхаус, и, когда Арчер не может отличить их друг от друга, он предлагает отвести их обоих домой и посмотреть, кто из них лучший дворецкий.
    • Арчер и Лана спорят о том, кто будет руководить миссией:

      Арчер: О, правда? Потому что она не указала командира Лану, так что я бы поспорила-

      Лана: С столбом забора?

      Лучник: Я бы не стал спорить с- [натыкается на что-то]] Двигайся, идиот!

      Пэм: Я еду так быстро, как только могу!

      Арчер: Не ты, а- [камера разворачивается, показывая, что Арчер на самом деле спорит со столбом забора (точнее, столбом)]

    • Пэм достает огромное зеркало, чтобы проверить дыхание Папы и случайно бросает ему: Лучник : Отличная работа, Оливер Кромвель!
      Пэм (шёпот в ужасе): Я убила Папу!
      Лучник: Да, поэтому я и сказал Оливер Кр-!
      Пэм (теперь прыгает на зеркало — и Поуп под ним): ИИСУС ХРИСТОС, Я ПОЛУЧУСЯ В АД! Я НАПРАВЛЯЮСЬ В АД! I’M G- [получает удар от Арчера]
      Арчер: : Пэм.
      Пэм: Да?
      Лучник: Слезь с Папы. [Пэм отпрыгивает, Арчер поднимает зеркало] Привет… Ваше Святейшество.
      • Несколько мгновений спустя входит Лана, и Пэм и Арчер пытаются что-то объяснить.

      Лана : Почему на гигантское зеркало О БОЖЕ ТЫ РАЗДАВИЛ ПАПУ?

    • Арчер не взял с собой спортивную сумку с оружием команды ИГИЛ, потому что он предположил — из картины — что швейцарская гвардия все еще использует алебарды.Излишне говорить, что, когда швейцарская гвардия ворвалась в комнату Папы с автоматами, Лана не стала тратить время на то, чтобы отругать его. (С другой стороны, поскольку на самом деле это была не швейцарская гвардия, Арчер не ошибся на 100%.)
    • Лана поняла, что плохой парень нанял их для защиты Папы Римского ИЗ-ЗА репутации ИГИЛ как плохого шпионского агентства. Лана говорит Пэм не рассказывать об этом Мэлори. Угадай, что будет в конце.

      Мэлори: (услышав, что ИГИЛ было нанято, потому что они такие ужасные) ЧТО!?

      Арчер и Лана: ПАМ!

    • Когда Вудхауса приводят изображать папу римского, он сначала мчится стрелять, а потом снова быть с ним достаточно для миссии.

      Лана: И с погодой, и тебе может понадобиться зонт, потому что будет дождь. Папы мертвые задницы.

        Арка «Морской проныра» 

    • Различные персонажи обсуждают сумасшествие Шерил
    • Ответ Мэлори на жалобы Рэя

      «О, засунь туда чужой пенис!»

    • Пэм продолжает есть веганских крабов и креветок, несмотря на то, что у нее действительно аллергия на сою

      «Я взрослый по обоюдному согласию!»

      • Мэлори приказывает Сирилу и Рэю найти записи Сесила и оставить Пэм умирать от анафилактического шока:

        Мэлори : И почему ты все еще стоишь там? Идти!

        Сирил : А ​​как же Пэм?

        Мэлори : Я куплю тебе новый!

      • Позже, когда она приказывает Сирилу и Рэю восстановить и уничтожить записи с камер наблюдения, Мэлори остается наедине с Пэм, которая стоит на коленях и пытается дышать.

        ( Пэм громко хрипит )
        Мэлори: Ну, не надо втирать!

    • Кригер модифицирует пушки ИГИЛ… при этом выше воздушного змея (обратите внимание на огромную кучу кокаина) и барабанит по воздуху «Тому Сойеру».
    • Капитан Мерфи говорит, что человек, не получивший акваланг, должен быть самым слабым пловцом.

      ( Арчер, Рэй и Сирил все смотрят на Лану )
      Лана : Ох, да ну вас, ребята !

    • Капитан Мерфи умирает, попав в ловушку под автоматом с газировкой в ​​обратном вызове Sealab 2021
    • Рэй снова парализован .Однако временно, так как просто у него короткое замыкание процессора.
      • Ранее Арчер обманом заставил его сбрить усы.
    • В конце мы слышим это от по понятным причинам обиженного Сирила:

      Сирил : Три ура маленькому Джонни Ублюдку!


    ФРАЗИРОВАНИЕ! БУМ!

    «Лана, это среднеазиатское ксенофобское марионеточное государство, в котором доминируют мужчины, чей диктатор изменил слова «хлеб» и «пятница» на имя своей СОБАКИ.»

    Мэлори Арчер (4×6 Once Bitten)

    Кригер: Я просто хочу помочь тебе закончить твой новый космический корабль. Почему это странно?
    Барри: Почему это странно? Потому что моя заветная цель в жизни — убить твоего маленького приятеля Арчера?
    Крайгер: Лучник? Ни за что, чувак, я… ненавижу этого парня!
    Барри: С каких это пор?
    Кригер: С тех пор, как он… спал с моей девушкой.
    Мицуко: Даттара Инони… (Хотел бы я быть…)
    Кригер: *бормочет* Так держать.
    Барри: Боже, это просто классический Арчер!
    Кригер: Верно? Я имею в виду, что не так уж и много сюрпризов для эгоцентричного алкоголика, который чувствует себя обязанным спать с каждой женщиной, которую он встречает, потому что это единственный способ заполнить пустоту внутри, где должна быть любовь его матери — ой!
    Барри: Что делать?
    Кригер: Одна секунда? *утки под столом*
    Лучник: *шепотом* Что за хрень?
    Кригер: *шепотом* Что, ты сказал быть убедительным!
    Лучник: *шепотом* Убедительно! Не намеренно обидеть!

    «Да, мой дорогой Стерлинг, иди за мной… Фраза, Бум.»

    Катя Казанова (Вискомуфта 4х5)

    *Арчер и Рон пытаются запрыгнуть в поезд*
    Арчер: Давай, беги как моложе! *садится в поезд* Хорошо, а теперь дай мне руку!
    Рон: *борется* Я не могу!
    Лучник: Да, можно!
    Рон: *протягивает руку* А-а-а-а! Давай, хватай! Хватай!
    Арчер: Ну, подожди секунду…
    Рон: Что ты делаешь?!
    Лучник: Уххх, думаю о том, как я ненавижу то, что Мать вышла за тебя замуж!
    Рон: Ты не ненавидишь, что она вышла за меня замуж!
    Арчер: Нет, да, я —
    Рон: Нееет, ты ненавидишь, что она вышла замуж за кого угодно, потому что ты хочешь, чтобы она принадлежала только тебе!
    Лучник: Что за?!
    Рон: Пейджинг Dr.Бейтс! Доктор Норман Баатес!

    «Эффект бабочки. Вы знаете, бабочка в Африке садится на нос жирафу, жираф чихает, это пугает газель, газель врезается в носорога, а носорог вслепую врывается в телефонную будку, как-то звонит в Нью-Йорк и говорит: «Эй, иди, убей этого идиота Рона из-за чемодана!» ПОТОМУ ЧТО НОСОСОРОГ ГОВОРИТ ПО-АНГЛИЙСКИ!»

    Стерлинг Лучник (4×4 Полуночный Рон)

    Рэй: Ноги робота.
    Кригер: Нееет, это не имеет ничего общего с робототехникой! Я говорю о БИОНИКЕ! От греческого слова… как… офигеть!
    Рэй: Есть ли греческое слово для «безумного»?
    Кригер: Да! Я имею в виду… Я предполагаю, что есть.

    Я не знал, что у виртуальной девушки Кригера действительно есть имя! Я пытался решить, как указать ее в чате и отметить ее, поэтому я из любопытства погуглил, и, очевидно, это Мицуко Миядзуми. Чему вы научитесь… 

    «Ха-ха, я просто мечусь от одного огнестрельного нападения к другому!»

    Sterling Archer (4×3 ноги)

    Лучник: Это безумие! Как Люк мог быть —
    Лана: Гей?
    Лучник: Мертвая, Лана.А твои маленькие гейские инсинуации даже не заслуживают…
    Пэм: Обойти вокруг?
    Лучник: *кидает лед в Пэм*

    «Боже, чувак, я не гей… Для других мужчин!… Я не могу толком объяснить. То есть, ты меня знаешь, я трахнул больше горячих цыпочек, чем съел горячих обедов, но… вот что-то о тебе».

    Лукас Трой (4×2 Ветер плачет, Мэри)

    Веб-семинар по настройке и расширению платформы тестирования SARS-CoV-2 RT-qPCR

     

    Пандемии COVID-19, вызванной коронавирусом SARS-CoV-2, можно эффективно противостоять только с помощью комбинированной стратегии карантина/социального дистанцирования и повсеместного ПЦР-тестирования на наличие вирусной РНК.Золотым стандартом в Бельгии является использование мазка из носоглотки, который берет медицинский работник и доставляет в лабораторию для тестирования в среде, которая обычно сохраняет вирус живым. Как аккредитованная ISO17025 лаборатория для услуг RT-qPCR, Biogazelle обладает уникальным набором навыков и опыта для количественного определения РНК RT-qPCR, чтобы разработать надежный, чувствительный и высокопроизводительный тест на SARS-CoV-2 за 10 дней. Крайне важным было использование реагентов, расходных материалов и инструментов, которые обеспечивают (полу)автоматизацию и непрерывность бизнеса, несмотря на дефицит во всем мире.

    На этом веб-семинаре, организованном и проведенном Tecan, соучредителем Biogazelle и директором по техническому обслуживанию профессором Джо Вандесомпеле, мы рассказали, как мы настроили и проверили рабочий процесс, а также как мы улучшаем его с точки зрения экономической эффективности и производительности.

    Ключевые темы:

    • Уникальные навыки и опыт компании Biogazelle в количественном анализе методом RT-qPCR
    • Стратегия Бельгии в тестировании RT-qPCR на SARS-CoV-2
    • Усовершенствованный количественный анализ данных RT-qPCR и интерпретация данных
    • Передовой опыт и советы по устранению неполадок при анализе данных
    • Преимущества автоматизации рабочего процесса от подготовки образцов, выделения РНК до RT-qPCR

    Tecan:
    Я хотел бы представить наш динамик.Сегодняшний спикер, Джо Вандесомпеле, является соучредителем и главным научным сотрудником Biogazelle, контрактной исследовательской организации, специализирующейся на ценных геномных приложениях для поддержки фармацевтических исследований, клинических испытаний и разработки диагностических тестов. Он также является профессором функциональной геномики рака и прикладной биоинформатики в Гентском университете, Бельгия. В 1997 году он получил степень магистра биологических наук и докторскую степень в области медицинской генетики. Он является автором более 250 научных статей в международных журналах, включая несколько новаторских публикаций в области количественного определения РНК и некодирующей РНК.Я очень рад, что Джо здесь, так что наслаждайтесь со мной вебинаром Джо.

    Слайд 1:
    Хорошо. Большое спасибо за любезное введение. Приятно быть здесь и спасибо за возможность представить нашу историю. Надеюсь, вы все видите мой экран.

    Слайд 2:
    Чтобы все были на одной странице, COVID-19 — это название болезни, аббревиатура от коронавирусной болезни 2019, а SARS-CoV-2 — это название вируса, сокращение от тяжелого острого респираторного заболевания. синдром коронавирус 2.Это одноцепочечный РНК-вирус с размером генома около 30 000 нуклеотидов. По состоянию на прошлую неделю (9 июля 2020 г.) 10 миллионов человек заразились этой болезнью, а полмиллиона умерли. Вызывает тревогу тот факт, что число заражений удвоилось по сравнению с прошлым месяцем. В ожидании вакцины для предотвращения или лекарства для его лечения ключевым приоритетом является предотвращение его распространения. Мы можем сделать это путем физического дистанцирования, мытья рук и ношения маски для лица, когда это необходимо, в сочетании с массовым ПЦР-тестированием для выявления и изоляции инфицированных людей.

    Слайд 3:
    Прежде чем мы углубимся в детали ПЦР-тестирования, несколько слов о том, кто мы такие. Biogazelle — это контрактная исследовательская организация (поставщик услуг), предлагающая ценные приложения для поддержки исследований, клинических испытаний и разработки диагностических тестов для фармацевтической и биотехнологической промышленности. Мы помогаем ускорить разработку новых методов лечения за счет открытия и проверки всех видов РНК-биомаркеров, а также разработки инструментов для оценки эффективности, безопасности и токсичности лекарств.Мы занимаем уникальную передовую позицию в области применения количественной ПЦР, цифровой ПЦР и секвенирования РНК.

    Слайд 4:
    19 марта мне позвонил министр и пригласил «Биогазель» принять участие в федеральной испытательной площадке. Менее чем за 2 недели, 2 апреля, у нас была первая версия нашей платформы для обработки 2000 образцов в день. С тех пор мы увеличились до 6000 в день. Сделать это за 2 недели было непростой задачей и возможной только благодаря напряженной работе, буквально днем ​​и ночью, семь дней в неделю, специальной командой.И, конечно же, это возможно только потому, что у нас есть многолетний международно признанный опыт в разработке ПЦР-тестов и клинических испытаний.

    Слайд 5:
    Вот обзор нашего соответствующего опыта в области количественной ПЦР. Biogazelle имеет аккредитацию ISO17025 для разработки и использования тестов количественной ПЦР в клинических испытаниях. Компания была основана на революционном методе нормализации количественной ПЦР (geNorm) и анализа данных (qbase+) с более чем 20 000 упоминаний и тысячами клиентов по всему миру.Основатели компании стали соавторами руководств MIQE по разработке, выполнению, анализу и отчетности по исследованиям количественной ПЦР, которые на данный момент цитируются более 10 000 раз. Мы проверили в мокрой лаборатории более 100 000 анализов количественной ПЦР, что превышает отраслевые стандарты; анализ SARS-CoV-2 — лишь один из них. А с апреля мы также являемся частью CSWG, инициативы JIMB (совместная инициатива по метрологии в биологии) Стэнфордского университета, занимающейся разработкой и предоставлением доступа к стандартам, контрольным материалам, межлабораторным сравнениям и знаниям для выполнять точные тесты на SARS-CoV-2.Конечной целью является создание «Партнерства по разработке стандартов диагностики COVID-19».

    Слайд 6:
    Тест RT-qPCR на SARS-CoV-2 состоит из 4 основных этапов, обозначенных здесь розовым цветом и выполняемых Biogazelle. Он включает перенос пробирки с первичным образцом в 96-луночный планшет для увеличения пропускной способности нижестоящего потока с последующей очисткой вирусной РНК, обнаружением вируса с помощью RT-qPCR, а также анализом данных и авторизацией.

    Важно отметить, что весь рабочий процесс является более сложным и, по сути, представляет собой многосторонний рабочий процесс, в котором участвуют медицинские работники, партнеры по логистике для изготовления тестовых наборов (мазок и пробирка), распределения и сбора, доставки их в лабораторию, а также ИТ-партнеры для регистрация образца и сообщение результата врачу.В течение первых шести недель тестирования первичные образцы предварительно обрабатывались на четырех разных внешних площадках командой из более чем 100 обученных людей. По состоянию на середину мая Biogazelle делает это в основном самостоятельно, в том числе за счет автоматизации этапа переформатирования первичной пробы.

    Примечательно, что «Биогазель» — всего лишь одна из пяти федеральных испытательных лабораторий; GSK, Janssens, UCB и Льежский университет также внесли свой вклад. Наконец, платформа работает под эгидой федерального института общественного здравоохранения Sciensano, федерального агентства по лекарственным средствам и товарам для здоровья (FAMHP) и национальной референс-лаборатории по тестированию SARS-CoV-2 в KU Leuven.Каждую работу координирует рабочая группа при поддержке Deloitte.

    Слайд 7:
    Чтобы визуализировать сложный рабочий процесс, VIB снял красивое трехминутное видео. Давай посмотрим.

    Слайд 9:
    В четырех других лабораториях рабочей группы используется коммерческий рабочий процесс, основанный на очистке вирусной РНК с помощью магнитных частиц и мультиплексном анализе RT-qPCR, одобренном CE-IVD. В Biogazelle, учитывая наш опыт в разработке тестов ПЦР и их использовании в клинических испытаниях, нам было поручено создать альтернативную платформу для снижения потенциальных рисков проблем с цепочкой поставок.Руководящими принципами были следующие:

    Прежде всего, мы хотели, чтобы наша платформа была гибкой и модульной, чтобы различные компоненты от разных поставщиков могли работать вместе, каждый из которых был оптимизирован для своей конкретной части рабочего процесса.

    Платформа должна была иметь высокую пропускную способность (не менее 6000 в день) и хорошо масштабироваться. Это означает, что мы вводим больше единиц данного модуля или больше инструментов в данном модуле, если это необходимо.

    Что касается непрерывности бизнеса, мы создали стратегический запас, постоянные заказы, прямые поставки и проверили альтернативных поставщиков.Поэтому нам действительно нужен был специальный сотрудник по закупкам, чтобы управлять всем этим. Например, для смеси RT-qPCR и выделения РНК у нас есть два проверенных поставщика, чтобы смягчить проблемы с цепочкой поставок.

    Мы также хотели, чтобы наша платформа была автономной, чтобы не было коммерческих решений от А до Я, большинство из которых являются относительно медленными и/или обычно сталкиваются с нехваткой инструментов и расходных материалов по всему миру.

    Наконец, наша платформа должна была быть высокого качества по умолчанию. Очевидно, что это диагностический тест, но он создан для постоянных инноваций и улучшений посредством внутренней перекрестной проверки.

    Slide 10:
    Наша платформа состоит из 16 инструментов для обработки 6000 образцов в день. Для дальнейшего масштабирования нам не нужно линейно увеличивать количество каждого инструмента. Например, наш робот для установки количественной ПЦР Tecan EVO100 может обрабатывать гораздо больше планшетов. Для количественной ПЦР мы не использовали модуль укладки наших инструментов для количественной ПЦР CFX384, но проверили его для укладки нескольких планшетов (для ДНК мы укладываем гораздо больше). Масштабы экстракции на 2000 образцов на центрифугу. Это примеры того, что мы называем модульным, гибким и интеллектуальным масштабированием.

    Слайд 11:
    Самым сложным этапом всего процесса является перенос отдельной пробирки пациента в 96-луночный планшет для последующей высокопроизводительной обработки в стандартном формате SBS (8 рядов, 12 столбцов). Не только потому, что это очень трудоемкий процесс, но и из соображений безопасности. Внутри и снаружи пробирки могут быть заражены активным вирусом, что представляет угрозу биобезопасности для операторов. Поэтому все обрабатывается квалифицированными операторами в боксе биобезопасности II класса.

    В течение первых шести недель тестирования мы все делали вручную и обучали несколько команд. Одна бригада из 3-х операторов могла обработать 500 проб за смену 4 часа. Обработка означает перенос аликвоты транспортной среды тампона в глубоколуночный планшет с последующим добавлением буфера для лизиса, что является первым этапом выделения РНК, который инактивирует вирус и делает безопасным дальнейшее использование 96-луночного планшета снаружи. кабинет.

    Для обработки 3000 проб в течение 8-часового рабочего дня необходимо 18 операторов и 9 боксов биобезопасности класса II.Эта процедура трудоемка, медленна, подвержена ошибкам и требует много операторов. Из-за высокой концентрации работы смены были ограничены 4 часами. По всем этим причинам мы внедрили автоматизацию, чтобы заменить этапы ручного переформатирования образцов.

    Слайд 12:
    Однако автоматизация — это только часть решения, поскольку она сопряжена со своей проблемой, т. е. размещением ее в лаборатории BSL3 или помещением в бокс биобезопасности. У нас в «Биогазели» такой лаборатории нет, а корпус шкафа стоит дорого со сроками изготовления 6-8 недель.Поэтому мы искали альтернативное решение, а именно деактивировать вирус перед тем, как приступить к работе с нашим роботом. Тепловая инактивация является часто применяемым методом, но его эффективность зависит от транспортной среды вируса. На практике рекомендуется широкий диапазон температур и продолжительности, но часто без подтверждения того, что вирус SARS-CoV-2 действительно инактивирован. Некоторые исследования даже предлагают не делать этого или регулировать настройки в каждой лаборатории.

    Мы представили альтернативное решение, т.е.е. Соберите мазок в раствор, инактивирующий вирус и сохраняющий РНК. Это решение не только делает работу с жидкостью для переноса безопасной, но и стабилизирует РНК, что обеспечивает более высокую чувствительность обнаружения при тестировании до 5 дней. Мы успешно протестировали несколько вариантов и в итоге остановились на DNA/RNA Shield от Zymo Research. Мы добавляем 0,002% метиленового синего для облегчения визуализации. Для молекулярного тестирования вирус не нужно оставлять живым. Поэтому я нахожу очень странным, что практически все коммерческие растворы для тампонов пытаются сделать именно это.

    Слайд 13:
    Принимая во внимание наш хороший опыт работы с жидкостными манипуляторами серии Tecan EVO, мы приобрели EVO200 для первичного переноса проб и подготовки лизата. Эта роботизированная система длиной 2 м оснащена сканером штрих-кода для сканирования пробирок пациента и планшета назначения, а также 8-канальным модулем обработки жидкости с датчиком жидкости для аспирации из пробирки пациента и дозирования в 96-луночный планшет. предварительно заполненный лизирующим буфером с использованием 96-канального плеча (MCA).Этот робот может обрабатывать 3000 пробирок за 8-часовую смену двумя операторами. Это сокращение в 9 раз по сравнению с ручной процедурой. Введение и проверка были довольно простыми; у нас был опыт работы с программным обеспечением, мы выполнили несколько пробных прогонов, провели так называемые прогоны с водой, а затем определили классы жидкостей, используя различные концентрации глицерина для имитации вязких жидкостей тампона.

    Slide 14:
    Чтобы выбрать подходящий набор для выделения РНК, мы оценили стоимость, простоту использования, пропускную способность, гарантированную доступность и, конечно же, производительность.Мы пошли на многое, сравнив 5 различных методов выделения РНК на стандартизированном наборе исходных разведений вируса и положительных и отрицательных образцах пациентов. Образцы пациентов и вирусный запас были собраны в 4 различных транспортных средах, которые обычно используются, включая жидкий Amies (буфер eSwab) и физиологический раствор с фосфатным буфером. Результаты были весьма шокирующими: разные методы выделения РНК показали очень разную эффективность; транспортные буферы также сильно различались с четким взаимодействием между набором и буфером.Слева я показываю серию серийных разведений инактивированных вирусных запасов от 10 -3 до 10 -5 для 2 наборов РНК и 4 буферов. Значения Cq по оси Y, log 10 коэффициента разбавления по оси X. Линейность и наклоны превосходны, но значения пересечения сильно различаются. Наилучшая и наихудшая комбинация набора/буфера отличается более чем на 5 циклов ПЦР, что эквивалентно 30-кратной разнице в чувствительности обнаружения РНК.

    Слайд 15:
    Для выделения РНК мы окончательно остановились на фильтровальных планшетах от Norgen Biotek или Zymo Research, обработанных в центрифуге.Мы используем центрифугу с 4 позициями для 96-луночных планшетов. Диспенсер epMotion используется для переноса лизата на фильтровальную пластину, а Viafill используется для быстрого дозирования промывочных и элюирующих буферов. Mantis используется для добавления 4 мкл контрольной добавки и РНК-носителя. РНК-носитель необходима для повышения эффективности экстракции, особенно образцов с низкой концентрацией.

    Один оператор может сделать 374 пробы за 90 минут. Таким образом, три оператора могут обработать 6000 образцов за 8-часовой рабочий день.Следует отметить, что другие автоматизированные или полуавтоматические решения требуют гораздо больших инвестиций и/или не обеспечивают такой же пропускной способности.

    Слайд 16:
    Для установки количественной ПЦР в 384-луночном планшете мы используем робота Tecan EVO100 с пипетирующей головкой 96 (или MCA). Выдают 14 мкл мастермикса, а затем 6 мкл образца РНК. Этот процесс занимает около 7 минут, но со всеми приготовлениями, сканированием штрих-кода и вводом в нашу систему LIMS, а также запечатыванием планшета мы рассчитываем на 20 минут для 384 образцов.

    Следует отметить, что в других проектах мы проводим 5 мкл КПЦР с тем же роботом (3 + 2 мкл), но для максимальной чувствительности обнаружения мы выбрали реакционные объемы 20 мкл. Как указывалось ранее, для обеспечения непрерывности бизнеса у нас есть две проверенные смеси, а именно одноэтапная RT-qPCR iTaq от Bio-Rad для зондов и одноэтапная RT-qPCR PrimeScript III от Takara.

    Слайд 17:
    Фактическая количественная ПЦР выполняется с использованием 6 приборов для количественной ПЦР CFX384 от Bio-Rad. Это немного перебор, так как 4 было бы достаточно.Мы даже не используем модуль стекирования, но протестировали его, и для одноэтапной RT-qPCR, кажется, мы можем складывать один или 2 планшета при комнатной температуре без потери чувствительности.

    Slide 18:
    Анализ данных — это огромная проблема. Вы можете себе представить, если вам нужно посмотреть 6000 кривых за один день и интерпретировать их для диагностической точности, вам нужна поддержка. Поэтому мы используем программное обеспечение FastFinder от UgenTec, которое позволяет автоматически передавать данные с прибора в облако, единую интерпретацию с небольшим количеством искусственного интеллекта и, что важно, имеет многочисленные проверки.Он смотрит на положительный и отрицательный контроль. Он смотрит на значения внутреннего контроля, выполняет анализ тенденций и анализ соседства для проверки возможного перекрестного загрязнения. Анализ данных происходит на двух уровнях. Существует уровень интерпретации и уровень авторизации, и он позволяет связать нашу систему LIMS с системой клинической лаборатории или больницы.

    Slide 19:
    Наша платформа одобрена Федеральным институтом общественного здравоохранения Sciensano, Федеральным агентством по лекарственным средствам и товарам для здоровья (FAMHP) и национальной справочной лабораторией.Мы также работаем в лаборатории, аккредитованной по стандарту ISO17025, и аккредитация для испытаний находится на рассмотрении. Мы участвовали в европейской схеме оценки качества и ежедневно обрабатываем слепые пробы для проверки квалификации в количестве 1/300 проб пациентов. Каждое утро мы получаем результаты контроля качества из национальной референс-лаборатории. Чтобы гарантировать качество, у нас есть несколько контролей в каждом эксперименте, а именно внутренняя вставка РНК, которая контролирует выделение РНК и RT-qPCR каждого образца, а также 1 положительный и отрицательный контроль рабочего процесса на партию из 93 образцов.Наконец, мы ввели цифровую ПЦР в качестве метода ортогональной проверки и для калибровки нашей платформы.

    Слайд 20:
    На следующих нескольких слайдах я хочу продемонстрировать количественную производительность нашей платформы и некоторые дополнительные проверки, которые мы выполнили. Здесь вы видите результаты так называемого теста на гомогенность планшета, функциональной проверки как робота для работы с жидкостями, так и прибора для количественной ПЦР. Мы распределяем 20 мкл той же смеси для ПЦР с матрицей и оцениваем однородность сигнала по всему планшету.С правой стороны вы видите чрезвычайно плотную группировку кривых усиления; и в представлении планшета слева вы видите тепловую карту полученных значений Cq. Обратите внимание, что шкала между синим и красным составляет всего 0,1 цикла. Явной пространственной закономерности нет. Пожалуйста, прочитайте наш блог, если вы хотите узнать больше об этом функциональном тесте или если вы хотите использовать наше бесплатное веб-приложение для анализа ваших данных об однородности.

    Слайд 21:
    Другим тестом контроля качества является объемный тест планшета с источником РНК.РНК элюируют, используя 30 мкл воды, свободной от нуклеаз, но восстановление несколько варьирует. В этом тесте мы хотим оценить надежность робота-дозатора Tecan EVO при работе с различными входными объемами. Мы сделали 24 повторения с объемом ввода 30, 25, 20 и 15 мкл (одной и той же концентрации) и повторили аспирацию 6 мкл. Обратите внимание на небольшой диапазон значений Cq, здесь от 22 до 23,4; средние значения очень похожи, а стандартные отклонения также не зависят от вводимого объема или количества повторов аспирации.Мы пришли к выводу, что с 13 мкл в 96-луночном планшете мы все еще можем точно аспирировать 6 мкл.

    Слайд 22:
    А вот и результаты недавнего исследования ВОК, в котором мы участвовали. Все образцы были названы правильно, и мы продемонстрировали превосходное количественное соответствие, как показано слева. В клинически значимом диапазоне мы отклоняемся менее чем на 50% от ожидаемой концентрации. Следует отметить, что из почти 500 участвовавших лабораторий 15% не смогли обнаружить РНК SARS-CoV-2 в низкоположительном образце с 200 копиями/мл, что эквивалентно 20 копиям при извлечении РНК или четырем копиям при количественной ПЦР.Кроме того, почти 1% лабораторий сообщили о ложноположительных результатах при тестировании на отсутствие вирусов и 2-3% имели ложноположительные результаты при тестировании других коронавирусов.

    Slide 23:
    И, наконец, я демонстрирую здесь предел обнаружения нашей платформы. LOD определяется как наименьшее количество, при котором обнаруживается > 95% повторов. Мы распределили 32 повтора 6, 3, 1 и 0 копий кДНК (копии, откалиброванные с помощью цифровой ПЦР). Во-первых, мы не обнаружили никакого сигнала в отрицательном контроле и обнаружили все повторы с 6 копиями на реакцию.При использовании 3-х копий мы потеряли сигнал в 5-ти лунках. Это означает, что наш предел обнаружения составляет от 3 до 6 копий на реакцию. Следует отметить, что когда мы рассчитывали количество копий на основе статистики положительных и отрицательных результатов Пуассона, результат и доверительный интервал 95% очень соответствовали ожидаемым входным данным, откалиброванным цифровой ПЦР.

    Слайд 24:
    На данный момент мы протестировали более 180 000 пациентов. Вы видите сгруппированную гистограмму из более чем 4000 значений Cq положительных случаев из примерно 130 000 тестов, проведенных к концу мая.Наблюдается монотонное увеличение значения Cq от 10 до 33; и резкое снижение на уровне 37, что соответствует нашему порогу единственной молекулы. Наблюдается поразительная разница в наблюдаемых вирусных нагрузках от Cq 7 до 37, эквивалентная разнице в миллиарды раз.

    Slide 25:
    Вы можете себе представить, что наличие образцов пациентов с очень высоким титром в рабочем процессе извлечения может вызвать риск перекрестного загрязнения. Итак, мы разработали метод для обнаружения возможного перекрестного загрязнения очень высоким положительным образцом рядом с отрицательным образцом.Этот так называемый анализ соседства встроен в наше программное обеспечение для анализа данных, чтобы автоматизировать обнаружение таких ложных событий. Если перекрестное загрязнение будет иметь место на практике, скважины с большим количеством соседних скважин будут иметь более высокую вероятность перекрестного загрязнения. У угловых лунок 3 соседа, у крайних лунок 5 соседей, а у обычных (розовых) лунок 9 соседей. Учитывая это, у нас есть слабые статистические доказательства того, что перекрестное загрязнение происходит как в лабораториях с высокой, так и с низкой пропускной способностью.

    Если у нас есть подозрение на перекрестное загрязнение, что, к счастью, происходит редко, мы автоматически ставим такой образец в очередь для повторного извлечения.

    Slide 26:
    В завершение вебинара я хочу показать, как будет выглядеть наша будущая платформа. До сих пор я объяснял нашу платформу 1.0. В версии 2.0 благодаря модульному подходу и постоянным инновациям у нас будут встроенные улучшения.

    Слайд 27:
    Несмотря на низкую скорость мутаций, SARS-CoV-2 продолжает накапливать мутации, сохраняясь в человеческой популяции. По мере появления новых последовательностей генома SARS-CoV-2 важно оценивать диагностические анализы на основе ПЦР.На основе аналитики генома COVID-19 в Edge Bioinformatics из Лос-Аламосской национальной лаборатории (США) 99,5% из более чем 50 000 геномов SARS-CoV-2 обнаруживаются с помощью анализа гена E и 98,03% с помощью гена N. Одновременное использование двух анализов не только немного повышает аналитическую чувствительность обнаружения, но и обеспечивает охват штаммов до 99,99%.

    Слайд 28:
    Во-вторых, по оценкам бельгийского института общественного здравоохранения Sciensano, в начале следующего года Бельгия будет сталкиваться с 40 000 ежедневных консультаций по поводу гриппоподобных симптомов в течение 100 дней.Большинство из них, как мы надеемся, не будут заражены SARS-CoV-2, но при проведении теста для исключения COVID-19 было бы полезно определить, инфицирован ли пациент гриппом или респираторно-синцитиальным вирусом. Поэтому мы разрабатываем 7-целевой 4-цветный мультиплексный анализ для совместного обнаружения SARS-CoV-2, гриппа A и B, а также RSV A и B.

    Slide 29:
    Наконец, несколько слов о объединении образцов. Возможно, вы видели пресс-релизы, этот в The New York Times, этот в The Wall Street Journal.И даже в Бельгии на прошлой неделе в Le Soir был один, где объединение образцов провозглашается чудесным решением для увеличения производительности и снижения затрат. Идея состоит в том, чтобы объединить несколько образцов в одну экстракцию и количественную ПЦР. Если результат пула отрицательный, предполагается, что все образцы в пуле отрицательны. Следует отметить, что объединение несложно с аналитической точки зрения, и оно действительно может сэкономить затраты и производительность, но до сих пор не проводилось систематического и крупномасштабного имитационного исследования с использованием реальных количественных данных для оценки влияния на чувствительность обнаружения.Как вы понимаете, путем объединения вы разбавляете целевой сигнал. Таким образом, слабые положительные сигналы могут быть пропущены, что приведет к ложноотрицательным результатам.

    Слайд 30:
    Мы использовали анонимные данные из 1632 положительных случаев для моделирования и сравнения стратегий объединения 1D и 2D. Эту работу проделал Джаспер Вервилт, докторант Гентского университета. Понятно, что чувствительность зависит от распространенности и различных стратегий объединения. Каждая точка является результатом моделирования 100 000 пациентов, отобранных из реальных количественных данных, при этом цвет отражает распространенность от 10%, что является высокой распространенностью, до 0.01%. На оси Y вы видите чувствительность обнаружения в зависимости от различных стратегий объединения. Вы видите, что ни один из них не достиг 100%, конечно, потому что вы разбавляете сигнал. В препринте Джаспер показывает, что выбор метода объединения и размера пула является сложным решением с компромиссом между эффективностью и чувствительностью, зависящим от распространенности. Мы считаем, что небольшие пулы 1D представляют собой компромисс между повышением эффективности и потерей чувствительности и могут быть полезны для эпиднадзора в условиях низкой распространенности.

    Слайд 31:
    На этом я хочу сделать выводы. Мы создали высокопроизводительную модульную платформу обнаружения SARS-CoV-2 RT-qPCR. Основным узким местом является первичная обработка образцов пациентов, за которой следует очистка РНК. Аналитические измерения, то есть количественная ПЦР, масштабируются лучше всего. Инактивация вирусов в трубке является ключевым фактором автоматизации, и мы создали индивидуальные решения, которые являются масштабируемыми, недорогими и обеспечивают непрерывность бизнеса. Таким образом, высокая пропускная способность и качество не исключают друг друга.

    Слайд 32:
    В завершение я хочу поблагодарить нескольких человек, а именно Бельгийскую оперативную группу, Справочную лабораторию, особенно Лис Лаэнен и Элс Декекер. Несколько компаний внесли свой вклад с такими инструментами, как Formulatrix, Инновационный центр BASF в Генте, Bio-Rad, Гентский университет, Inbiose, CIMIT, Janssen и, наконец, вся команда по COVID-19 в Biogazelle и особенно люди здесь в алфавитном порядке, Ян Хеллеманс, Том Маес, Питер Местдаг, Неле Нийс, София Шолларт, Гаэль Ван Северен и Питер Витынк.На этом спасибо за внимание и буду рад ответить на вопросы.

    Сессия вопросов и ответов

    Большое спасибо за очень интересную презентацию Джо. Пока что в поле для вопросов есть несколько вопросов, но вы можете задавать вопросы.

    Вопрос:
    Я начну с первого вопроса, который рекомендуется объединять в случаях с большим количеством положительных результатов.

    Ответ:
    Да. Это действительно зависит. Существуют варианты объединения, которые рекомендуются для высокой распространенности.Пожалуйста, подождите еще несколько дней, пока мы не опубликуем рукопись в виде препринта в Интернете, но это действительно зависит от стратегии и распространенности. И для каждого есть решение, которое всегда работает с небольшой потерей чувствительности. Но я думаю, что не так уж сложно добраться до 95%.

    Вопрос:
    Хорошо. Следующий вопрос: существуют ли какие-либо критерии, которые используются для принятия решения о том, какие образцы следует объединять, являются ли они образцами высокого риска? Скажем, дом престарелых, где уже подтвердили случай?

    Ответ:
    Обязательно.Я думаю, что FDA недавно выступило с рекомендациями о том, что любая стратегия объединения должна иметь чувствительность не менее 95% для использования в диагностике. Это сложно, но с этим можно справиться. Я думаю, они рекомендуют объединить только пять. Я думаю, что вы можете провести лучшие эксперименты по объединению, объединив больше образцов, значительно увеличив пропускную способность и сократив затраты на так называемые эксперименты по наблюдению, когда вы отслеживаете пандемию среди населения или коллективов. И там можно объединить от восьми до двенадцати сэмплов или даже больше, но у вас будет небольшая потеря чувствительности.Но я думаю, что это подводит меня к вопросу, когда более низкая чувствительность компенсируется обнаружением большего количества случаев. Например, если вы работаете в условиях низкой распространенности, скажем, 0,1%, как показано на моем слайде, если вы проведете 10 000 тестов с идеальным анализом, без объединения, со 100% чувствительностью, вы обнаружите 10 случаев. Предположим, вы применяете стратегии объединения, которые имеют более низкую чувствительность, скажем, 95%. Если бы вы могли масштабироваться до 100 000 тестов, немного пожертвовав чувствительностью, вы все равно могли бы обнаружить 85 случаев, что в восемь раз больше.Так что я думаю, что есть место для объединения, возможно, не в качестве диагностического инструмента, а в большей степени для наблюдения.

    Вопрос:
    Хорошо. У меня тут другой вопрос. Стоимость за тест, что является типичным вопросом.

    Ответ:
    Очень сложно это комментировать. Я думаю, мы можем обсудить это здесь для нашей платформы, но это не совсем актуально. Главный драйвер — пропускная способность. Мы заметили, что вы можете прийти к оптимальному сценарию, но для этого часто требуется много образцов.Таким образом, мы наиболее рентабельны при 3000 образцов в день. Как только мы отклоняемся от этого значения, безусловно, снижаемся, наша стоимость за образец увеличивается. Сама qPCR является предельной стоимостью. Я думаю, что мы стоим около 1 евро только за праймеры и зонды, а извлечение qPCR стоит пару евро. Но, конечно, вам нужно инвестировать в инструменты, у вас есть амортизация, у вас есть рабочая сила и так далее. Так что это довольно сложная схема, которая будет отличаться от места к месту. Я рад обсудить больше в автономном режиме, если это действительно представляет интерес.

    Вопрос:
    Хорошо. Есть еще вопрос. Программное обеспечение размещено на серверах на месте или в облаке?

    Ответ:
    Да, это облачное решение. Таким образом, UgenTec имеет свое программное обеспечение в облаке, и все делается в облаке в безопасной среде в соответствии с отраслевыми стандартами. Чрезвычайно эффективный, чрезвычайно полезный для использования в среде с такой высокой пропускной способностью.

    Вопрос:
    Хорошо. Еще один вопрос здесь. Рассматривали ли вы методы без экстракции и RT-qPCR непосредственно на образце?

    Ответ:
    Да.Мы его протестировали, нарисовали несколько препринтов, может быть, и несколько статей. Конечно, это было бы Святым Граалем, без добычи, потому что добыча стоит дорого. Это отнимает много времени. Тем не менее, мы протестировали, я думаю, пять или шесть различных методов без экстракции, и мы были разочарованы их чувствительностью. Они работают? Да, но вы теряете чувствительность. Таким образом, для диагностического теста, где вы видите этот огромный диапазон вирусных нагрузок от чрезвычайно высоких положительных до практически едва положительных, мы не хотели идти на какой-либо риск и поддерживать высокую диагностическую чувствительность, мы не использовали дополнительные бесплатные методы.Если вы уверены, что работаете в режиме с высокими положительными пробами, то однозначно можете подумать. Это увеличивает пропускную способность, снижает затраты, но неизменно снижает чувствительность.

    Решение проблем высокопроизводительного тестирования на SARS-CoV-2

     

     

    В настоящее время широко признано, что высокопроизводительное тестирование образцов имеет решающее значение для эффективного контроля SARS-CoV-2, вируса, вызывающего COVID-19. В результате лаборатории по всему миру быстро расширяют свои возможности тестирования образцов; однако достижение беспрецедентного уровня пропускной способности образцов при сохранении качества и точности не обходится без проблем.

    На этом веб-семинаре, организованном и проведенном Twist Biosciences, директор по безопасности Biogazelle профессор Джо Вандесомпеле разделила трибуну с UgenTec, чтобы обсудить советы и передовой опыт по настройке и оптимизации рабочих процессов тестирования на SARS-CoV-2.

    Крис Торн (Twist Biosciences):
    Всем привет и добрый день, доброе утро, добрый вечер, где бы вы ни были, и добро пожаловать на сегодняшний вебинар Twist Twisted и круглый стол, посвященный решению проблем высокопроизводительного SARS-CoV-2. тестирование.Меня зовут Крис Торн, и я старший менеджер по полевому маркетингу в Twist. Прежде чем мы начнем, немного домашнего хозяйства. Как вы заметили, ваши микрофоны не включены, поэтому во время вебинара мы будем держать все линии отключенными. У нас будут вопросы, и, я надеюсь, у нас будет интересная дискуссия после презентаций. Если у вас есть вопросы, используйте поле вопросов и ответов в нижней части экрана, а не отправляйте их в чат. Наконец, как только мероприятие завершится, как только вы уйдете, мы направим вас на краткий опрос, и мы будем очень благодарны за любой отзыв, который вы можете дать нам, заполнив его.

    Крис Торн (Twist Biosciences):
    Итак, формат сегодняшнего вебинара, если хотите, немного отличается от наших предыдущих вебинаров тем, что мы очень рады, что сегодня к нам присоединятся два спикера, которые выступят на тему решение проблемы высокопроизводительного тестирования на SARS-CoV-2. Я действительно хотел бы призвать всех оставаться до конца, так как после того, как мы закончим презентации, к нашим спикерам присоединится Ребекка Ньюджент, директор по исследованиям и разработкам Twist, для того, что должно стать действительно проницательным вопросом и ответом в стиле круглого стола.Как я уже сказал, если у вас есть вопросы, задавайте их по мере продвижения в поле вопросов и ответов.

    Крис Торн (Twist Biosciences):
    Первым из наших сегодняшних докладчиков будет Джо Вандесомпеле, директор по информационным технологиям и основатель Biogazelle, ИТ-директор, специализирующийся на ценных приложениях геномики для поддержки фармацевтических исследований, клинических испытаний и разработки диагностических тестов. Джо также является профессором функциональной геномики рака и прикладной биоинформатики в Университете Гента, Бельгия, и всемирно известным экспертом в области количественного определения РНК и некодирующей РНК.

    Крис Торн (Twist Biosciences):
    Нашим вторым спикером сегодня будет Джеймс Грейсон. Джеймс из UgenTec. Джеймс является ведущим специалистом по полевым приложениям в Северной и Южной Америке в UgenTec, где он обладает более чем 10-летним опытом автоматизации лабораторных рабочих процессов. До прихода в UgenTec Джеймс был руководителем отдела автоматизации молекулярного рабочего процесса в Siemens Healthineers, где он работал над определением потребностей клиентов в рабочем процессе и разработкой индивидуальных решений.

    Крис Торн (Twist Biosciences):
    Итак, Джо, сейчас я передам вам, и пусть вы берете это отсюда.

    Джо Вандесомпеле (Биогазель)

    Слайд 3: Хорошо, большое спасибо за любезное вступление. Я счастлив быть здесь. В ожидании вакцины для предотвращения или лекарства для лечения ключевым приоритетом является предотвращение его распространения. Мы можем сделать это путем физического дистанцирования, мытья рук и ношения маски для лица, когда это необходимо, в сочетании с массовым ПЦР-тестированием для выявления и изоляции инфицированных людей.

    Slide 4: Biogazelle занимает уникальную передовую позицию в применении количественной ПЦР, цифровой ПЦР и секвенирования РНК.Мы являемся аккредитованной по стандарту ISO17025 контрактной исследовательской организацией для разработки тестов количественной ПЦР и их использования в клинических испытаниях. Компания была основана на революционном методе нормализации количественной ПЦР (geNorm) и анализа данных (qbase+) с более чем 20 000 цитирований и 1000 клиентов по всему миру. Основатели компании стали соавторами руководств MIQE по разработке, выполнению, анализу и отчетности по исследованиям количественной ПЦР, которые на данный момент цитируются более 10 000 раз. Мы проверили в мокрой лаборатории более 100 000 анализов количественной ПЦР, что превышает отраслевые стандарты; анализ SARS-CoV-2 — лишь один из них.А с апреля мы также являемся частью CSWG, инициативы JIMB (совместная инициатива по метрологии в биологии) Стэнфордского университета, занимающейся разработкой и предоставлением доступа к стандартам, контрольным материалам, межлабораторным сравнениям и знаниям для выполнять точные тесты на SARS-CoV-2. Конечной целью является создание «Партнерства по разработке стандартов диагностики COVID-19».

    Слайд 5: Тест RT-qPCR на SARS-CoV-2 состоит из 4 основных аналитических этапов, обозначенных здесь розовым цветом.Он включает перенос пробирки с первичным образцом в 96-луночный планшет для увеличения пропускной способности нижестоящего потока с последующей очисткой вирусной РНК, обнаружением вируса с помощью RT-qPCR, а также анализом данных и авторизацией. Важно отметить, что весь рабочий процесс довольно сложен и, по сути, представляет собой многосторонний рабочий процесс, в котором участвуют медицинские работники, партнеры по логистике или клинические лаборатории для изготовления тест-наборов (тампонов и пробирок), распределения и сбора, доставки их в лабораторию и ИТ-отдела. партнеров для оформления пробы и сообщения результата врачу.И по возможности сделать все это в течение 24 часов.

    Слайд 6: Для визуализации сложного рабочего процесса было снято красивое 3-минутное видео. Ссылка будет передана модератором вебинара.

    Слайд 7: В разгар мировой цепочки поставок реагентов и инструментов мы установили масштабируемую платформу менее чем за 2 недели, придерживаясь набора уникальных принципов проектирования. Это стало возможным только благодаря нашему опыту в разработке тестов ПЦР и их использовании в клинических испытаниях.Прежде всего, мы хотели, чтобы наша платформа была гибкой и модульной, чтобы различные компоненты от разных поставщиков могли работать вместе, каждый из которых был оптимизирован для своей конкретной части рабочего процесса. Гибкость и модульность: мы используем разные компоненты от разных поставщиков, каждый из которых оптимизирован для своей конкретной части рабочего процесса. Модули можно заменять, и мы используем автоматизацию там, где это может иметь значение.
    Платформа должна была иметь высокую пропускную способность с целью не менее 6000 в день и разумную масштабируемость.Это означает, что мы вводим больше единиц данного модуля или больше инструментов в данном модуле, если это необходимо.

    Что касается непрерывности бизнеса, мы создали стратегический запас, постоянные заказы, прямые поставки и проверили альтернативных поставщиков. Поэтому нам действительно нужен был специальный сотрудник по закупкам, чтобы управлять всем этим. Например, для смеси RT-qPCR и выделения РНК у нас есть два проверенных поставщика, чтобы смягчить проблемы с цепочкой поставок. Мы также хотели, чтобы наша платформа была автономной, чтобы не было коммерческих решений от А до Я, большинство из которых являются относительно медленными или, как правило, сталкиваются с нехваткой инструментов и расходных материалов по всему миру.Наконец, наша платформа должна была быть высокого качества по умолчанию, но создаваться для постоянных инноваций и улучшений за счет внутренней перекрестной проверки.

    Slide 8: Наша платформа состоит из 16 инструментов для обработки 6000 образцов в день. Для дальнейшего масштабирования нам не нужно линейно увеличивать каждый инструмент. Например, наш робот для установки qPCR может обрабатывать гораздо больше образцов без изменений. Для количественной ПЦР мы не использовали модуль укладки прибора для количественной ПЦР, но проверили его для укладки нескольких планшетов (для ДНК мы укладываем гораздо больше).Масштабы экстракции на 2000 образцов на центрифугу. Это то, что мы называем модульным, гибким и интеллектуальным масштабированием.

    Слайд 9: Самым сложным этапом всего процесса является перенос отдельной пробирки пациента в 96-луночный планшет для последующей высокопроизводительной обработки в стандартном формате SBS (8 рядов, 12 столбцов). Не только потому, что это очень трудоемкий процесс, но и из соображений безопасности. Внутри и снаружи пробирки могут быть заражены активным вирусом, что представляет угрозу биобезопасности для операторов.Поэтому все обрабатывается квалифицированными операторами в боксе биобезопасности II класса.

    Одна бригада из 3 операторов может обработать 470 проб за 4-часовую смену. Обработка означает перенос аликвоты транспортной среды тампона в глубоколуночный планшет с последующим добавлением буфера для лизиса, что является первым этапом выделения РНК, который инактивирует вирус и делает безопасным дальнейшее использование 96-луночного планшета снаружи. кабинет. Для обработки 3000 образцов за 8-часовой рабочий день необходимо 18 операторов и 9 боксов биобезопасности.Из-за высокой концентрации работы продолжительность смены ограничена 4 часами. Чтобы уменьшить зависимость от квалифицированных ручных операторов, мы также внедрили автоматизацию.

    Слайд 10: Наша роботизированная система Tecan Freedom EVO 200 оснащена сканером штрих-кода для сканирования трубок пациента и планшета назначения, а также 8-канальным модулем обработки жидкости с датчиком жидкости для аспирации из трубки пациента и дозирования в 96-дюймовую емкость. -луночный планшет, предварительно заполненный буфером для лизиса с помощью 96-канального рычага.Этот робот может обрабатывать 3000 пробирок за 8-часовую смену тремя операторами. Это сокращение более чем в 6 раз по сравнению с ручной процедурой. Важно отметить, что точная настройка необходима для обработки тампонов внутри пробирок и очень вязкой природы образцов.

    Slide 11: Чтобы выбрать подходящий набор для экстракции РНК, мы оценили стоимость, простоту использования, пропускную способность, гарантированную доступность и, конечно же, производительность. Мы пошли на многое, сравнив 5 различных методов выделения РНК на стандартизированном наборе исходных разведений вируса и положительных и отрицательных образцах пациентов.Образцы пациентов и вирусный запас были собраны в 4 различных транспортных средах, которые обычно используются, включая жидкий Amies (буфер eSwab) и физиологический раствор с фосфатным буфером. Результаты были весьма шокирующими: разные методы выделения РНК показали очень разную эффективность; транспортные буферы также сильно различались с четким взаимодействием между набором и буфером. Слева я показываю серию серийных разведений инактивированных вирусных запасов от 10 -3 до 10 -5 для 2 наборов РНК и 4 буферов.Значения Cq по оси Y, log 10 коэффициента разбавления по оси X. Линейность и наклоны превосходны, но значения пересечения сильно различаются. Наилучшая и наихудшая комбинация набора/буфера отличается более чем на 5 циклов ПЦР, что эквивалентно 30-кратной разнице в чувствительности обнаружения РНК.

    Slide 12: Для выделения РНК мы окончательно остановились на фильтровальных планшетах от Norgen Biotek или Zymo Research, обработанных в центрифуге. Мы используем центрифугу с 4 позициями для 96-луночных планшетов.Диспенсер epMotion 96xl используется для переноса лизата на фильтровальную пластину, а VIAFILL используется для быстрого дозирования промывочных и элюирующих буферов. MANTIS используется для добавления 4 мкл контрольной добавки и РНК-носителя. РНК-носитель необходима для повышения эффективности экстракции, особенно образцов с низкой концентрацией. Один оператор может сделать 374 образца за 90 минут. Таким образом, три оператора могут обработать 6000 образцов за 8-часовой рабочий день. Следует отметить, что другие автоматизированные или полуавтоматические решения требуют гораздо больших инвестиций и/или не обеспечивают такой же пропускной способности.

    Слайд 13: Для установки количественной ПЦР в 384-луночном планшете мы используем робота Tecan EVO100 с пипетирующей головкой 96 (или MCA). Выдают 14 мкл мастермикса, а затем 6 мкл образца РНК. Этот процесс занимает около 7 минут, но со всеми приготовлениями, сканированием штрих-кода и вводом в нашу систему LIMS, а также запечатыванием планшета мы рассчитываем на 20 минут для 384 образцов. Чтобы максимизировать чувствительность обнаружения, мы выбрали реакционные объемы 20 мкл. Как указывалось ранее, для обеспечения непрерывности бизнеса у нас есть две проверенные смеси, а именно одноэтапная RT-qPCR iTaq от Bio-Rad для зондов и одноэтапная RT-qPCR PrimeScript III от Takara.

    Слайд 14: Фактическая количественная ПЦР выполняется с использованием 4 приборов для количественной ПЦР CFX384 от Bio-Rad. Нам не нужно использовать модуль штабелирования, но мы протестировали его, и для одноэтапной RT-qPCR кажется, что мы можем штабелировать один или 2 планшета при комнатной температуре без потери чувствительности.

    Slide 15: Анализ данных — это огромная проблема. Вы можете себе представить, если вам нужно просмотреть 6000 кривых за один день и интерпретировать их для диагностической точности, вам нужна поддержка. Мы используем программное обеспечение FastFinder от UgenTec, которое позволяет автоматически передавать данные с прибора в облако, единую интерпретацию с небольшим количеством искусственного интеллекта и, что важно, имеет многочисленные проверки.Он смотрит на положительный и отрицательный контроль. Он смотрит на значения внутреннего контроля, выполняет анализ тенденций и анализ соседства для проверки возможного перекрестного загрязнения. Анализ данных происходит на двух уровнях. Существует уровень интерпретации и уровень авторизации, и он позволяет связать нашу систему LIMS с системой клинической лаборатории или больницы.

    Slide 16: Наша платформа одобрена Федеральным институтом общественного здравоохранения Sciensano и Федеральным агентством по лекарственным средствам и товарам для здоровья (FAMHP).Мы также работаем в лаборатории, аккредитованной по стандарту ISO17025, с аккредитацией на проведение испытаний. Мы участвовали в европейской схеме оценки качества и обрабатываем слепые образцы от наших клиентов. Чтобы гарантировать качество, у нас есть несколько контролей в каждом эксперименте, а именно внутренний всплеск РНК, который контролирует выделение РНК и RT-qPCR каждого образца, а также 2 положительных и отрицательных контроля рабочего процесса на партию из 92 образцов. Наконец, мы ввели цифровую ПЦР в качестве метода ортогональной проверки и для калибровки нашей платформы.

    Слайд 17: Говоря о контрольных образцах, на следующих трех слайдах я хочу проиллюстрировать, как мы используем контрольную РНК Twist Bioscience. Во-первых, мы используем его в качестве положительного контроля для RT-qPCR, в результате чего мы добавляем 1000 молекул в лунку h22 в каждом планшете. Он служит не только в качестве контроля, но также может использоваться для анализа тенденций и межсерийной калибровки, если это необходимо.

    Слайд 18: В качестве одного из экспериментов, проведенных во время разработки анализа, мы создали серию серийных разведений положительного контроля РНК от 25 000 копий до 1 копии на постоянном фоне вкрапленной РНК с последующей дуплексной RT-qPCR. тестирование.Это позволяет определить линейность или коэффициент детерминации, эффективность RT-qPCR, значение Cq отдельной молекулы. Он также позволяет определить предел обнаружения, определяемый как самая низкая концентрация, при которой обнаруживается 95% повторов.

    Слайд 19: Справа вы видите визуальное представление 32 повторов 6, 3, 1 и 0 копий кДНК (копии, откалиброванные с помощью цифровой ПЦР). Как и ожидалось, мы не обнаружили никакого сигнала в отрицательном контроле и обнаружили все повторы с 6 копиями на реакцию.При использовании 3-х копий мы потеряли сигнал в 5-ти лунках. Это означает, что наш предел обнаружения составляет от 3 до 6 копий на реакцию с использованием этой конкретной смеси qPCR и анализа E-гена.

    Слайд 20: Наконец, мы использовали положительную контрольную РНК Twist также для квалификации наших инструментов для количественной ПЦР, чтобы продемонстрировать соответствие назначению и эквивалентность диагностического теста по сравнению с различными инструментами. Среди прочего, с тестированием серии серийных разведений, а также пластины гомогенности, в которой мы тестируем 384 идентичных образца, как показано справа.Мы хотим видеть хорошую линейность, эффективность, воспроизводимое определение предела обнаружения, а также однородные значения вызова Cq и значения флуоресценции в конечной точке. Следует отметить, что у нас есть бесплатное приложение, доступное на нашем веб-сайте, которое может обрабатывать эти типы данных из инструмента qPCR и фактически выполняет функциональную проверку любого инструмента qPCR. Кроме того, ссылка для этого будет передана модератором.

    Slide 21: В завершение своей части я хочу показать, какие текущие разработки у нас есть.Несмотря на низкую скорость мутаций, SARS-CoV-2 накапливает мутации по мере того, как сохраняется в человеческой популяции. По мере появления новых последовательностей генома SARS-CoV-2 важно оценивать диагностические анализы на основе ПЦР. На основе анализа генома COVID-19 в Edge Bioinformatics из Лос-Аламосской национальной лаборатории (США) 99,5% из более чем 50 000 геномов SARS-CoV-2 обнаруживаются с помощью анализа гена E и 98,03% с помощью гена N. Одновременное использование двух анализов не только немного повышает аналитическую чувствительность обнаружения, но и увеличивает охват штаммов до 99.99%

    Slide 22: По оценкам бельгийского института общественного здравоохранения Sciensano, в начале следующего года в Бельгии в течение 100 дней будут ежедневно получать 40 000 обращений по поводу гриппоподобных симптомов (при населении в 11 миллионов жителей, что эквивалентно 1 в 275 человек). Большинство из них, как мы надеемся, не будут заражены SARS-CoV-2, но при проведении теста для исключения COVID-19 было бы полезно определить, инфицирован ли пациент гриппом или респираторно-синцитиальным вирусом. Поэтому мы разрабатываем 7-целевой 4-цветный мультиплексный анализ для совместного обнаружения SARS-CoV-2, гриппа A и B, а также RSV A и B.

    Слайд 23: На этом я заканчиваю. Мы создали высокопроизводительную модульную платформу обнаружения SARS-CoV-2 RT-qPCR. Основным узким местом является первичная обработка образцов пациентов, за которой следует очистка РНК. Аналитические измерения, то есть количественная ПЦР, масштабируются лучше всего. Мы создали индивидуальное решение, которое является масштабируемым, имеет меньшую стоимость и обеспечивает непрерывность бизнеса. Наконец, контрольные образцы имеют ключевое значение для разработки тестов и обеспечения качества.

    Slide 24: В завершение я хочу поблагодарить нескольких человек, а именно Бельгийскую рабочую группу, несколько компаний, предоставивших такие инструменты, как Formulatrix, Инновационный центр BASF в Генте, Bio-Rad, Гентский университет, Inbiose, CIMIT и Janssen. , и, наконец, вся команда по борьбе с COVID-19 в Biogazelle.На этом я передаю слово следующему выступающему и с нетерпением жду обсуждения.

    Джеймс Грейсон (UgenTec)

    Хорошо. Спасибо, Джо, и привет всем. Позвольте мне просто поделиться своим экраном здесь. Привет, и еще раз спасибо, Джо, за это. В течение следующих нескольких минут мы рассмотрим некоторые сложности высокопроизводительных сред тестирования и некоторые инструменты, которые можно использовать для управления этой сложностью.

    За последние несколько месяцев мы все стали свидетелями различных уровней реагирования на пандемию COVID-19.За последние несколько месяцев UgenTec посчастливилось участвовать в поддержке как местных, так и национальных инициатив по тестированию на COVID-19.

    Что интересно в этой чрезвычайной ситуации, в которой мы находимся, так это проблемы быстрого масштаба, позволяющие в некоторых случаях проводить тестирование на уровне всей страны. Некоторые из этих сложностей, с которыми мы столкнулись, могут включать в себя изменчивость, возникающую из-за различных инициатив, связанных с использованием различных инструментов, поставщиков и производителей, поэтому наличие смешанной совокупности тестирующих устройств, наборов для переменных анализов от разных поставщиков, поэтому наличие как самих наборов для переменных, так и других наборы могут иметь некоторую изменчивость в генах, на которые они нацелены, а также иметь изменчивость в своих собственных системах контроля.

    Мы определенно видим проблему в наличии обученного клинического персонала для интерпретации и сообщения результатов. В этих случаях решающее значение имеет внедрение стандартизированных методов измерения и проверки производительности лаборатории в нескольких местах. На следующих слайдах мы покажем, как можно справиться с некоторыми из этих сложностей с помощью интеллектуальных программных решений, не зависящих от инструментов и анализов.

    Для решения некоторых проблем, связанных с высокопроизводительным скринингом на COVID, платформа UgenTec FastFinder использовалась для поддержки крупномасштабных инициатив по тестированию.Это решение FastFinder состоит из анализа и анализа, независимого от инструмента, независимого от анализа анализа данных ПЦР и решения для составления отчетов о результатах. Анализ выполняет оценку кривых, отчеты о результатах и ​​применение дерева решений, что представляет собой автоматизацию ваших ролей интерпретации анализа непосредственно из вашей IFU или SOP. Это очень важно в таких случаях, потому что в этом высокопроизводительном рабочем процессе, когда вы можете поддерживать более одного анализа, более одного набора, у вас могут быть разные роли интерпретации, и мы можем оцифровать это, чтобы убедиться, что все применяется правильно.При этом мы берем клиническую запись далеко за рамки стандартного программного обеспечения прибора.

    Далее у нас рабочий процесс. Рабочий процесс — это система управления воздушным движением вашей лаборатории. Это позволяет вам управлять приборами и отслеживать образцы в процессе тестирования. Мы поговорим об этом чуть позже. Наконец, у нас есть идеи. FastFinder Insights — это система отслеживания операционной эффективности вашей лаборатории. Insights предоставляет стандартизированные информационные панели в подробной лабораторной аналитике. Он визуализирует ключевые параметры производительности, такие как процент положительных результатов для критически важных целей, производительность контроля качества для всего парка инструментов и объектов, а также время выполнения тестирования.

    Все эти решения, как упомянула Джо, представляют собой облачное программное решение, и мы надежно размещены и легко масштабируемы благодаря Microsoft Azure и нашему партнерству с ней. Мы соответствуем стандарту ISO 1344. Соответствуем стандарту ISO 27001.

    Мы углубимся в анализ FastFinder. Анализ является основным компонентом, который используется и был выделен Джо. Анализ — это наша помощь с данными, управляемая искусственным интеллектом, помощь в управлении данными.

    В типичном рабочем процессе в типичных лабораторных условиях мы видим, как пользователям приходится взаимодействовать с программным обеспечением прибора, вручную просматривать и интерпретировать кривые амплификации ПЦР, сопоставлять их с различными флагами, которые могут существовать или не существовать в программном обеспечении, и пересекать проверка их на соответствие правилам и интерпретациям IFU или SOP.Идея FastFinder заключается в том, что мы можем оцифровать все это и сделать это одним щелчком или полностью автоматическим действием, чтобы перейти от необработанных данных к отчетному ответу.

    Часть того, как это работает для нас, заключается в том, что мы применяем искусственный интеллект для интерпретации кривой ПЦР. В простом прямом случае у нас есть выборочное пороговое значение, которое большинство инструментов на рынке используют для определения ECT или Cq. В случае идеального учебника это очень применимо, но я думаю, что все мы испытали, работая в отрасли, что кривые ПЦР могут быть далеки от учебника.Мы используем искусственный интеллект, чтобы смотреть не на порог, а на различные особенности кривой, наклоны, просто на поведение в целом, на то, как вещи могут иметь артефакты от приборов, химических процессов или рабочих процессов, и учитываем это при интерпретации кривой и создании либо Cq и, наконец, вызов этой кривой.

    Частью нашего процесса является обучение набора данных, который может быть очень специфичным для данного прибора или анализа. Легко понять, что вы потенциально можете назвать отрицательное отрицательным, а чистый положительный положительным, но что вы делаете с серой зоной и как вы управляете кривыми, которые ведут себя не так, как в учебнике? Это часть того, что делает наше программное обеспечение, поскольку мы можем обучать алгоритмы искусственного интеллекта интерпретировать кривые, которые явно отрицательные, но это может быть что-то вроде ползучей кривой с восходящим дрейфом, и вы относитесь к этому как к отрицательному и что вы делаете с этим .

    Здесь мы видим примеры программного интерфейса, и здесь важно увидеть и понять, что программное обеспечение является агностическим. В этом случае COVID, и это экстренные случаи, мы можем поддерживать значительное количество инструментов от многих разных производителей инструментов, все с одним интерфейсом, и при этом иметь то же ощущение и прикосновение, к которым привыкли некоторые люди, насколько они могут видеть мои кривые, ваша тарелка выложена. Затем, помимо этого, используя приложение дерева решений, мы можем объединить результаты, провести анализ и сравнить его со всеми критериями достоверности для интерпретации.При этом мы можем сгенерировать окончательный результат, а также пометить любые результаты, которые являются нетипичными или аномальными, или что-то, что конечный пользователь хотел бы вызвать для них и пометить для ручной проверки. Таким образом, мы можем поддержать как отсутствие обученного персонала, так и стандартизированное поведение устного перевода при наличии различных человеческих факторов, участвующих в принятии окончательного решения.

    Здесь справа мы видим некоторое представление о том, как мы строим эту интерпретацию, наш построитель дерева решений, как мы можем добавлять правила и различные диапазоны Cq для выполнения, и это то, что мы можем помочь и использовать для захвата правил IFU.

    Далее мы собираемся немного поговорить о рабочем процессе, а рабочий процесс — это ваша цепочка хранения образцов, включая планшеты, инструменты и анализы. С помощью рабочего процесса мы полностью рассмотрим все инструменты, используемые для взятия образца из исходной первичной пробирки и для получения окончательного результата. Мы можем фиксировать различные рабочие процессы и представлять их на панели инструментов, чтобы мы могли фиксировать все этапы рабочего процесса, все задействованные инструменты. Если возможно, мы можем говорить об этих инструментах и ​​производительности панели мониторинга на протяжении всего рабочего процесса и всего процесса тестирования.Мы можем просматривать недавний анализ, журналы любых проблем или ошибок и просто иметь представление с точки зрения информационной панели о том, как работает лаборатория и на каких этапах в настоящее время может находиться тот или иной конкретный образец.

    Мы можем перевести это на очень подробный уровень в рамках рабочего процесса, где мы можем отслеживать отдельный образец на протяжении всего его процесса в лаборатории, и мы можем делать это автоматически. Мы можем видеть, когда образец впервые переносится из первичной пробирки на планшет. Мы можем отследить это через экстракцию и ПЦР-анализ, результат.У нас есть цепочка поставок и аудит, сопровождающий весь процесс. Мы можем сделать это как автоматически, так и вручную. Некоторые инструменты в этих рабочих процессах не автоматизированы, возможно, они не создают файлы, и мы можем добавить различное отслеживание аудита и отслеживание в процессе тестирования, чтобы, по крайней мере, подтвердить, что шаги были выполнены.

    Еще одной ключевой функцией FastFinder является Insights. Insights — оперативная бизнес-аналитика лаборатории. Мы можем использовать Insights в дополнение к FastFinder, рабочему процессу и анализу для создания автоматических отчетов и проверки производительности инструментов и аналитических данных оператора.Мы можем делать вещи, которые, как мне кажется, здесь очень важны, например, контролировать качество партии за партией с помощью систем управления.

    С помощью Insights мы можем предоставить стандартизированную лабораторную аналитику, с помощью которой мы можем отслеживать такие параметры, как частота тестирования, доля положительных результатов и другие ключевые показатели эффективности лаборатории. В этом случае мы можем отслеживать с течением времени положительную деградацию COVID, проходящего через лабораторию. Мы можем видеть количество тестов и производительность, количество тестов, количество инструментов, количество сайтов, задействованных в лаборатории.Мы можем отслеживать индивидуальное поведение элементов управления, таких как положительный контроль или отрицательный контроль. Думаю, в отрицательном контроле не так много.

    Это пример информационной панели, которую можно использовать для отслеживания производительности в лаборатории. Здесь мы видим, что у нас есть полный доступ к тестированию нескольких сайтов, и все выделено серым цветом в целях конфиденциальности. Мы можем видеть производительность отдельных лабораторий в рамках инициативы по тестированию на нескольких площадках. Мы видим, какие инструменты используются в этих лабораториях, с какой скоростью.Мы можем видеть различные анализы, которые тестируются, и все это можно контролировать удаленно из центрального места, если есть надзорный орган.

    Здесь мы видим то, что, как мне кажется, очень важно для общей концепции национальной инициативы, такой как тестирование на COVID-19, где мы можем наблюдать за поведением положительных контролей с течением времени по инструментам, по мишеням и действительно искать вариации. Мы можем отметить отклонение поведения от системы. Это то, что можно использовать для устранения неполадок, для мониторинга отдельных показателей на сайтах.Это то, что использовалось в различных программах мониторинга квалификации, которые реализованы в некоторых из этих инициатив по тестированию для постоянного контроля качества лаборатории, а также на разных площадках и инициативах.

    В заключение, компиляция и реализация высокопроизводительной программы тестирования связаны со значительными проблемами, доступностью ресурсов и управлением ресурсами, а также стандартизацией и управлением программами. Мы работали со многими крупномасштабными инициативами, чтобы смягчить эти проблемы с помощью интеллектуального программного обеспечения.Спасибо за ваше время и вернуться к вам, Крис.

    Круглый стол

    Крис Торн (Twist Biosciences):
    Спасибо, Джеймс, и спасибо, Джо. Это были два очень интересных разговора. Я очень ценю это. С нетерпением жду дальнейшего обсуждения этих вопросов, но прежде чем мы перейдем к этому, я просто хочу начать с приветствия Ребекки Ньюджент, которая присоединяется к нам сегодня из Калифорнии и является директором по исследованиям и развитию Twist Life Sciences. Она присоединилась к Twist, проработав много лет в индустрии биотоплива и экологически чистых химикатов, и возглавляет наши группы исследований и разработок, сосредоточенные на разработке синтетической биологии и секвенирования целевого продукта обогащения следующего поколения.Ребекка, добро пожаловать и спасибо, что присоединились к нам.

    Ребекка Ньюджент (Twist Biosciences):
    Привет, спасибо, что пригласили меня.

    Крис Торн (Twist Biosciences):
    Я хочу начать с общего вопроса. Мы видели там две довольно технические презентации, и я думаю, что они подчеркивают объем работы, проделанной для того, чтобы все это настроить за последние несколько месяцев, но я думаю, мы не услышим девять месяцев назад, никто из нас не работал над COVID-19.Я думаю, что нам пришлось увеличить скорость, чтобы это произошло, и я подумал, и Джо, возможно, я мог бы задать этот вопрос вам для начала. Здесь есть напряжение. Мы имеем дело с этой пандемией между необходимостью быстрой настройки этих рабочих процессов и обеспечением того, чтобы мы могли удовлетворить эту потребность как можно быстрее, с необходимостью быть как можно более строгими с точки зрения используемых нами рабочих процессов. Интересно, не могли бы вы просто прокомментировать, видели ли вы это напряжение с точки зрения работы, которую вы делали, и как вы, ребята, подошли к этому.

    Джо Вандесомпеле (Biogazelle):
    Да, отличный вопрос. Мы испытали большое напряжение и давление. Наладив его менее чем за две недели, мы, очевидно, не сможем добиться того же качества диагностики, что и лаборатория, которая занимается жизненно важной диагностикой в ​​течение 20 лет. Если они реализуют новый тест для этого нового вируса, гораздо проще внедрить его в лабораторию, имеющую соответствующий опыт. Что вы можете сделать, так это контролировать, контролировать, контролировать и проверять каждый шаг как можно лучше.Я думаю, мы должны быть честными, что со временем мы стали лучше. Это невозможно сделать за две недели. Наличие контрольных образцов и знание того, чего ожидать, когда что-то отрицательное, когда на карту поставлена ​​ваша чувствительность или специфичность и так далее, позволяет вам увидеть, насколько хорошо вы справляетесь. Обмен образцами — это то, что мы делали очень рано с лабораториями, которые уже были запущены и работали. Проведите кольцевое тестирование, обменяйтесь образцами, участвуйте в схемах повышения квалификации, учитесь и смотрите, что можно улучшить.Это постоянная деятельность, и я думаю, что мы все еще этим занимаемся. Мы всегда можем совершенствоваться, мы всегда можем совершенствоваться во многих аспектах, и мы делали это в течение последних четырех или пяти месяцев. Это постоянная деятельность по изучению и совершенствованию диагностического теста.

    Крис Торн (Twist Biosciences):
    Да, и Ребекка, возможно, я мог бы задать и вам этот вопрос. Одним из основных принципов синбио является процесс проектирования, создания, тестирования, обучения. Можно ли это все еще применять в контексте пандемии? У нас есть такая роскошь или мы должны сделать это правильно с первого раза, как вы думаете?

    Ребекка Ньюджент (Twist Biosciences):
    Очень интересные вопросы.Знаешь, да, я думаю, ты можешь. Я думаю, что Джо только что ответила на тот вопрос, что вы устанавливаете базовый уровень, проводите свой первый эксперимент, а затем видите, как вы можете повторять и улучшать этот первый эксперимент. Ответ Джо действительно резонировал с тем, что мы сделали в Twist: когда мы разрабатывали синтетические элементы управления, мы прошли путь от концепции до коммерческого запуска примерно за три недели. Мы никогда не делали этого раньше. Это было невероятное усилие, и вот что мы узнали из нашей первой итерации создания двух контрольных штаммов.Затем мы применили эти знания к другим выпущенным нами элементам управления, которые являются просто генетическими вариантами SARS-CoV-2. Затем мы взяли эти знания и применили их к большему количеству средств контроля различных вирусов с помощью респираторных средств контроля. Да, есть место для циклов проектирования, сборки, обучения и тестирования даже в том темпе, в котором мы движемся во время этой пандемии.

    Крис Торн (Twist Biosciences):
    Интересно, и Джеймс, один из слайдов, который бросился мне в глаза, был ближе к концу вашей презентации, где вы показали, как ваше программное обеспечение позволяет просматривать несколько лабораторий, потенциально использующих одно и то же программное обеспечение.Вы заметили, что эти лаборатории могут… как лаборатории учатся друг у друга, и можете ли вы дать обратную связь, когда дела идут не так хорошо? Есть ли коллективные усилия по улучшению того, что вы видите с вашей точки зрения?

    Джеймс Грейсон (UgenTec):
    Существует несколько различных способов, но определенно то, что мы видим, работает именно с этой программой мониторинга квалификации. Мы видим перегруженную программу контроля качества, которая внедряется с использованием различных элементов управления, чтобы действительно отслеживать, как работают отдельные лаборатории, а затем использовать эти данные, чтобы увидеть, как внести улучшения, чтобы найти возможные проблемы с системами.Нас попросили делать такие вещи, как отмечать различные типы ошибок и доводить их до сведения людей. Я думаю, что это действительно интересный механизм оптимизации производительности для действительной попытки добиться наилучшего качества результатов с использованием различных инструментов и реагентов, доступных в этой ситуации.

    Jo Vandesompele (Biogazelle):
    Если я могу добавить к этому, то удивительно, что вы можете узнать, просматривая множество данных, тенденции, которые вы просто не замечаете, прежде всего, если у вас нет инструментов, но с огромные объемы данных вы видите вещи, которые вы не видели раньше.

    Крис Торн (Twist Biosciences):
    Джо, у тебя есть пример? Мне просто интересно.

    Jo Vandesompele (Biogazelle):
    Конечно, повторные циклы замораживания-оттаивания реагентов, новый купленный праймер синтезирован. Вы видите разницу в производительности, если со временем накапливаете ее, и у вас есть много измерений с одним и тем же лотом, что раньше оставалось для нас незамеченным.

    Крис Торн (Twist Biosciences):
    Это подводит меня к другому вопросу: вы показываете использование контролей в 96-луночных планшетах как в контроле процесса, но видите ли вы необходимость в … у вас, очевидно, есть многоступенчатая система, но применяются ли меры контроля во влажном потоке или есть пробелы, которые, по вашему мнению, потребуют различных средств контроля для обеспечения такого уровня надзора?

    Джо Вандесомпеле (Biogazelle):
    Это хорошая мысль. Мы можем много говорить об элементах управления, идеальных элементах управления. Я думаю, что существуют сотни различных контрольных материалов, а также разные школы мысли. У нас определенно есть средства контроля рабочего процесса с самого начала.Наши отрицательные контроли, на самом деле перенос образца — это отрицательный образец, который действительно идет на первичный перенос образца, извлечение РНК, RT-qPCR, экспорт данных. Затем мы включаем дополнительный отрицательный контроль и наши положительные контроли. В самом начале мы используем только положительный контроль от вас, ребята, который был получен после выделения РНК, который является контролем RT-qPCR и контролем анализа данных, но он не является контролем для выделения. Вот почему у нас теперь есть образцы пациентов с очень положительными результатами, которые мы разбавляем и вносим в каждый планшет в качестве более репрезентативного образца, который подвергается первичному переносу, экстракции и RT-qPCR.Я думаю, что есть место для элементов управления на каждом этапе рабочего процесса, но важно учитывать, что не все элементы управления контролируют все, что вам нужно, и поэтому вам необходимо встроить несколько элементов управления.

    Ребекка Ньюджент (Twist Biosciences):
    Вы упомянули отрицательный контроль. Не могли бы вы подробнее остановиться на важности или различиях между положительным контролем и отрицательным контролем, а также о типах соображений, которые учитываются при определении того, чем они на самом деле являются?

    Джо Вандесомпеле (Biogazelle):
    Это сложный вопрос?

    Ребекка Ньюджент (Twist Biosciences):
    Нет, это не должен быть сложный вопрос.Я имею в виду, что с моей точки зрения, я имею в виду, продолжайте, но я могу уточнить больше, если хотите.

    Jo Vandesompele (Biogazelle):
    Что ж, наши отрицательные контроли, я не уверен, являются ли они лучшими или вы могли бы рассмотреть другие варианты, но для нас это водный контроль в том же буфере, что и образец пациента, потому что Матрица тоже влияет. Идеальным отрицательным контролем, конечно же, был бы образец пациента, отрицательный результат которого подтвержден, потому что тогда все, включая человеческую РНК в этом образце, может иметь специфический матричный эффект.Это более сложно и трудно сделать, поэтому мы используем воду в качестве отрицательного контроля. Я думаю, самое главное здесь — показать, что вы не видите сигнала, когда его не ожидаете. Ложные срабатывания явно представляют собой огромную проблему, и они происходят из двух источников. Это реагенты, и это хорошо известно, задокументировано, что многие поставщики усердно работали над тем, что их реагенты, праймеры, зонды, смеси для ПЦР, реагенты для экстракторов даже были загрязнены, вероятно, наращивая их производство путем синтеза такого количества синтетических матриц, чтобы удовлетворить потребности. весь мир, что все, я думаю, производственные объекты, не все, но многие из них, были заражены шаблоном SARS-CoV-2.Вам нужен контроль, чтобы убедиться, что ваша лаборатория, ваши реагенты не загрязнены, но перекрестное загрязнение также является серьезной проблемой, особенно в лаборатории с высокой пропускной способностью. Я знаю, что этого не должно быть там. Мы этого не хотим, но у некоторых из этих пациентов такая высокая вирусная нагрузка, там миллиарды молекул, так что крошечная капля фемтолитра может создать положительный сигнал в соседней лунке. Вот почему вам нужны элементы управления, чтобы попытаться зафиксировать это. Мы делаем это на двух уровнях: наши отрицательные контроли в процессе, а также с помощью программного обеспечения, которое помечает предупреждение, если два положительных образца находятся рядом друг с другом, что предупреждает нас, и мы можем затем позвонить, следует ли нам отправить их для повторного извлечения. или нет.

    Ребекка Ньюджент (Twist Biosciences):
    Это именно то, что я искал. Когда мы разрабатывали наши респираторные средства контроля, одна из вещей, которые мы очень хотели продемонстрировать, заключалась в том, что их можно использовать в качестве положительного контроля для выделения или обнаружения таких вирусов, как грипп и бокавирус, но мы также убедились, что это отрицательный контроль. контроль за SARS-CoV-2, потому что перекрестное заражение является проблемой, чувствительное обнаружение также является серьезной проблемой. Мне нравится, что вы говорите о перекрестном заражении и о том, как вы используете программное обеспечение.Я полагаю, Джеймс, вопрос для вас или просто для того, чтобы перенести это на сторону программного обеспечения, на какие флаги или предупреждения вы обращаете внимание, вы говорили о серых зонах для тех образцов, которые могут быть положительными или могут быть отрицательными. Вы обращаетесь к этим данным, когда видите два положительных результата рядом друг с другом?

    Джеймс Грейсон (UgenTec):
    Конечно, вопрос состоит из двух частей, в зависимости от того, как вы его задали. Во-первых, да, интерпретация самого положительного, так это положительное? Это явно положительный результат нормального образца? Является ли это поздним положительным результатом, который может быть связан с ложноположительным результатом, то есть чем-то, что действительно усиливается очень поздно? Затем мы делаем оценку близости.Мы посмотрим на пространство вокруг положительного и низкого положительного результата и посмотрим, есть ли вероятность того, что это могло быть локальное перекрестное заражение, и мы поднимем этот флаг как один из многих других флагов, которые мы можем поставить, чтобы привлечь внимание. рецензенту, чтобы проверить это. Это действительно встроено в то, что мы называем деревом решений, которое работает с конечным пользователем для построения набора логики. Как вы хотите, чтобы об этом сообщили? Если мы увидим эту морфологию, если мы увидим этот паттерн, как вы хотите, чтобы мы к этому относились? Хотите, чтобы мы обратили на это ваше внимание? Вы хотите немедленно аннулировать этот результат и отправить его на повторное тестирование? Требуется много работы в сотрудничестве с конечным пользователем, чтобы убедиться, что мы поняли, как они хотели бы интерпретировать данные в самом программном обеспечении.Но используя интеллект, мы можем захватить всю информацию и флаги и провести умную перекрестную проверку. Имеет ли смысл, что это может быть перекрестное заражение от местного соседа? Я не знаю. Для меня это действительно крутая часть анализа и интеллекта.

    Крис Торн (Twist Biosciences):
    Я думаю, после серии вопросов о том, как мы пришли к этому месту, я хочу спросить всех вас троих, считаете ли вы, что некоторые из полученных вами знаний которые вы взяли за последние шесть месяцев, будут теми вещами, которые вы сможете использовать как в контексте вашей текущей работы, так и в различных областях, связанных с заболеваниями.Возможно, если бы я мог начать с Джо. Очевидно, что Biogazelle занимается такой работой уже несколько лет, но, возможно, не в таких масштабах. Видите ли вы, что продолжите в том же духе, или что вы как компания хотите с надеждой продвинуть вперед, когда пандемия останется позади?

    Джо Вандесомпеле (Biogazelle):
    Чтобы было понятно, что мы являемся экспертами в области количественной ПЦР. Мы разрабатываем, разрабатываем, проверяем количественную ПЦР, цифровые ПЦР-тесты, однако мы никогда раньше не проводили диагностику, и это действительно другая игра с мячом не только в масштабах, в которых мы работаем, но и в более строгих требованиях к времени выполнения и качеству или гарантированному качеству. так как выполнение молекулярного диагностического теста действительно отличается.Мы определенно узнали новый способ сделать это с высокой пропускной способностью, короткими сроками выполнения работ и превосходным качеством, которое действительно требуется лаборатории молекулярной диагностики, работающей с лабораторией. Именно этот опыт мы хотели бы привнести в наши клинические испытания. Мы проводим много клинических испытаний для наших фармацевтических или биотехнологических партнеров, но это тоже очень похоже. Возможно, сроки выполнения клинических испытаний не так строги, но производительность и качество часто находятся на одном уровне. Мы определенно извлекли много уроков, которые мы можем использовать в отделе клинических испытаний.Кроме того, наша система LIMS раньше была, я бы сказал, не идеальной, и сегодня мы должны были сделать ее идеальной, чтобы отслеживать каждую деталь из нового разбавления. Это также очень полезно для будущей работы.

    Крис Торн (Twist Biosciences):
    Хорошо. Джеймс, а ты? Программа FastFinder применима только к инфекционным заболеваниям, или вы планируете расширять ее, или, возможно, она уже применима?

    Джеймс Грейсон (UgenTec):
    В прежние времена, до COVID, FastFinder был инструментом клинической диагностики.Мы запустили FastFinder, и его аналитическая часть действительно была сосредоточена на клиническом рынке и интерпретации результатов или отчетности, но до всего этого мы также расширились до различных областей, таких как онкология, PGX, мы поддерживаем ag bio, ветеринарное тестирование и множество различных приложения и множество различных модальностей, не только rtPCR, но и кривая плавления и различные другие смежные анализы, подобные PCR. Я думаю, что с этой стороны приятно работать во всех этих разных отраслях. В частности, эта пандемия COVID, как программное решение, как клиническое решение, было приятно видеть, что мы можем масштабироваться достаточно, чтобы проводить сотни тысяч анализов в день по всему миру с некоторыми из программ, в которых мы участвуем.Что я действительно вижу, мы разрабатываем за последние месяцы, так это программное обеспечение для анализа. Именно этот уровень бизнес-аналитики для реального отслеживания производительности на нескольких сайтах, в разных местах, лабораториях и модальностях, я думаю, был критически важным, и, надеюсь, мы сможем продолжить его реализацию для того, что будет дальше. Я думаю, что именно здесь я очень горжусь UgenTec и своей небольшой ролью в ней, а также небольшой ролью во всей пандемии. Было хорошо быть вовлеченным.

    Крис Торн (Twist Biosciences):
    Ребекка, так что Twist занимается синтезом ДНК, а мы делаем РНК.Скажи мне, что мы продвигаем вперед в том, что касается тебя, а также обучения твоей команды?

    Ребекка Ньюджент (Twist Biosciences):
    Да, мы узнали, насколько многофункциональна наша платформа и насколько широко распространена ДНК как инструмент. ДНК является исходным материалом для множества различных инструментов. В этом случае мы используем ДНК в качестве шаблона для создания синтетических вирусных контролей. Мы также использовали нашу платформу для создания продуктов обогащения мишеней следующего поколения, чтобы мы могли обнаруживать и характеризовать различные вирусные геномы.Я думаю, что вывод, который мы извлекли из этого, заключается в нашей способности использовать нашу платформу очень быстрым способом, очень быстрым способом реагировать на вызовы и угрозы, с которыми сталкивается наше общество, а также в качестве инструмента, который мы можем использовать для достижения цели. обогащение, а затем синтетический контроль для обнаружения и характеристики возникающих патогенов или вирусных угроз.

    Сессия вопросов и ответов

    Вопрос:
    Вопрос одного из наших участников: «Какой объем данных используется для обучения FastFinder?» Я думаю, это хороший вопрос, чтобы задать его сейчас, потому что, возможно, вы получаете больше данных, чем шесть месяцев назад.Это также доказанная возможность улучшить алгоритмы искусственного интеллекта или, возможно, вы могли бы немного поговорить об этом.

    Ответ:
    Да, и, чтобы было ясно, это не моя личная область знаний, искусственный интеллект и все такое, но мы были на рынке с FastFinder с искусственным интеллектом и интерпретацией кривых в течение трех-четырех лет. если не больше. Я иногда теряю след. У нас действительно нестандартная производительность, верно? Для интерпретации этих кривых мы находимся на очень высоком уровне точности.Где мы тренируемся и где мы пытаемся улучшить производительность, и где всегда есть место для роста, так это различные рабочие процессы, различные химические процессы и различные инструменты, которые связаны друг с другом. Некоторые из этих вещей могут, я думаю, что Джо упомянул только поведение кривых с разными наборами в сочетании с разными буферами и то, как это изменение может привести к различным морфологиям и кривым. Именно здесь мы действительно нацеливаемся и работаем с отдельным рабочим процессом и отдельными пользователями этого рабочего процесса, чтобы получить экспертную интерпретацию этих крайних случаев.Вот где мы всегда учимся и всегда понимаем, как вы используете те уникальные угловые случаи, которые не являются идеальной кривой PCR.

    Вопрос:
    У меня есть вопрос к Ребекке относительно элементов управления от Али Бектаса, просто интересно, не могли бы вы рассказать немного подробнее о том, как синтетические элементы управления сами по себе являются КК? Очевидно, мы хотим поставить их Джо, чтобы он мог использовать их из трубки. Что мы делаем для того, чтобы наши лампы были такими, какими мы их называем?

    Ответ:
    Процесс контроля качества состоит из нескольких этапов.